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第44卷第3期                蒋骋昊，卞晶晶，谢海峰. 迷迭香酸⁃锌配合物的抗氧化和抗菌性研究［J］.
                  2024年3月                    南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（3）：336-341，351                     ·337 ·


                在，酚类化合物可以与金属离子配合形成络合物，                            殖作用、抗氧化性和抗菌性，为探究RA⁃金属配合物
                优先结合位点受多酚结构、金属离子类型和周围介                            的生物活性机制提供参考。
                质酸碱度的影响 。已经发现配合物的生物学性
                               ［3］
                                                                  1  材料和方法
                质在络合时增强，配合物具有比游离配体更高的
                           ［4］
                生物学效应 。例如桑黄素与氧钒（oxovanadium，                      1.1  材料
                IV）络合后提高了对超氧自由基和羟基自由基的清                               RA（纯度>95％）、氯化锌（ZnCl2 ）（上海麦克林
                除活性 。木犀草素⁃铁配合物具有增强的抗氧化                            公司）；CCK⁃8 试剂盒（Cell Counting Kit⁃8，Dojido 公
                      ［5］
                          ［6］
                和抗炎活性 。由此可见，金属离子与多酚络合是                            司，日本）；α⁃MEM 培养基（Gibco公司，美国）；4％青
                提高多酚生物活性和生物利用度的重要途径。                              霉素和链霉素（杭州碧云天公司）；胎牛血清（FBS，
                    迷迭香酸（rosmarinic acid，RA）常见于迷迭香、               ExCell 公司，乌拉圭）；LB 液体培养基（上海阿拉丁
                鼠尾草、薄荷等植物中，是一种具有1个羧基、2个带                          公司）；小鼠颅骨前成骨细胞系MC3T3⁃E1（中国科学
                有邻苯二酚结构的苯环（A和A’）、不饱和碳碳双键                          院上海细胞所）；金黄色葡萄球菌 S.aureus（ATCC
                和酯基团的酚酸 。RA的生物活性包括抗氧化、抗                           25923，南京医科大学江苏省口腔疾病研究重点实
                              ［7］
                炎、抗菌、抗病毒、抗过敏、抗肿瘤和神经保护等，通                          验室样本库）；总抗氧化能力检测试剂盒 2，2⁃联氮⁃
                过清除自由基和活性氧在生物系统中表现出强大                             二⁃（3⁃乙基苯并噻唑⁃6⁃磺酸）二铵盐［2，2′⁃azinobis
                                                     ［8］
                的抗氧化能力，其抗氧化性高于维生素 E 。比较                          （3 ⁃ ethylbenzothiazoline ⁃ 6 ⁃ sulfonic acid）ammonium
                多种羟基肉桂酸衍生物的抗氧化性，RA 活性最高                           salt，ABTS］（杭州碧云天公司）；扫描电子显微镜
                                                  ［9］
               （RA>绿原酸>咖啡酸>阿魏酸>香豆酸） 。RA通过                        （MAIA3，TESCAN 公司，捷克）；微孔板分光光度计
                减少小鼠单侧输尿管梗阻侧肾皮质脂质过氧化物的                           （PerkinElmer，Waltham公司，美国）。
                                                          ［10］
                产生而发挥抗氧化应激作用，改善肾间质纤维化 。                           1.2  方法
                RA通过调节NF⁃κB和JNK、MAPK 信号通路来改善                      1.2.1 RA⁃Zn的合成
                脂多糖诱导的炎症         ［11］ ；可能通过抑制机体炎症水                    RA溶于10 mL无水乙醇中，使其浓度为0.01 mol/L，
                平和纠正免疫功能紊乱的途径，加速大鼠口腔溃                             加入 0.01 mol/L 的 ZnCl2水溶液 5 mL，采用 NaOH 调
                疡的愈合    ［12］ 。同时RA对多种细菌具有抑制和杀伤                    节pH为8.5，室温下反应24 h，3 500 r/min离心10 min，
                作用，如表皮葡萄球菌、葡萄球菌、粪肠球菌等 。                           去除上清液，无水乙醇洗涤3次后，干燥得到RA⁃Zn。
                                                       ［13］
                    金属离子是人体不可或缺的元素，参与机体                           1.2.2  扫 描 电 子 显 微 镜（scanning electron micro⁃
                各种活动，其中锌（zinc，Zn）参与 2 000 多种转录因                   scope，SEM）观察
                子的构成，并作为300多种酶的辅助因子                  ［14］ 。Zn直        利用SEM拍摄RA和RA⁃Zn的表观图像。
                接或间接介导抗氧化作用，可以结合蛋白质和肽中                            1.2.3 红外光谱分析
                的硫醇和巯基，保护脂质双分子层免受氧化，稳定                                使用溴化钾（KBr）将样品制备为颗粒，并在
                细胞膜   ［15］ 。Zn还参与骨细胞的能量代谢，可刺激成                    400~4 000 cm 范围内监测RA和RA⁃Zn的红外光谱。
                                                                              -1
                骨细胞增殖分化，促进胶原蛋白合成，抑制破骨细                            1.2.4 紫外⁃可见光谱分析
                胞骨吸收而发挥理想的成骨活性                ［16］ 。抗菌性是 Zn           利用 NanoDrop 紫外光分光光度计记录 RA 及
                              ［17］
                最为熟知的特性 。已发现多种多酚与Zn离子螯合                           RA⁃Zn 的紫外可见光谱。采用摩尔比法确定 Zn 离
                后，生物活性增强，如槲皮素⁃Zn配合物增强了抗氧化                         子与 RA 的摩尔比。RA 和 ZnCl2溶解于三羟甲基氨
                性，绿原酸与Zn络合后抗氧化和抗菌水平提高                    ［18-19］ 。  基甲烷盐酸盐（Tris⁃HCl）缓冲液（pH=8.5）中，浓度
                RA 具有可以和 Zn 离子结合的羧酸和邻苯二酚结                         为 0.01 mol/L，通过保持RA的量不变而改变Zn离子
                构，据此推测RA和Zn离子络合后可能会增强抗氧化                          摩尔量，使摩尔比［RA］∶［ZnCl2 ］=1∶0、10∶3、5∶2、2∶1、
                性和抗菌性，并促进成骨细胞增殖。                                  5∶3、20∶13、10∶7、5∶4、20∶17、10∶9、20∶19、1∶1、2∶3、
                    本研究合成了 RA 与 Zn 的配合物（RA⁃Zn），并                  5∶9、1∶2，记录具有不同摩尔比溶液的光谱。
                利用扫描电镜、红外光谱和紫外⁃可见光谱分析合成                           1.2.5 细胞增殖实验
                前后的结构。选定 4 种多酚（漆黄素、荭草苷、RA、                            将 MC3T3⁃E1 细胞以 3 000 个/孔的密度分别接
                丹参酚酸B），利用细胞增殖实验评价它们对成骨细                           种在具有不同浓度（0、1×10 、1×10 、1×10 mol/L）的
                                                                                                -5
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                胞的增殖作用，同时评价 RA⁃Zn 和 RA 的促细胞增                      漆黄素、荭草苷、RA、丹参酚酸B的96孔板中，培养1、
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