Page 48 - 南京医科大学学报自然科学版

第44卷第3期
·338 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年3月

3 d 后吸出培养液，每孔加入100 μL含10%CCK⁃8的 球菌（革兰氏阳性菌）生长的抑制作用。100 μL金黄
新鲜培养基，避光孵育2 h，在450 nm波长下测量吸光 色葡萄球菌（浓度为1×10 CFU/mL）分别与100 μL不
6
度值。以同样的方法检测RA和RA⁃Zn（100 μmol/L） 同浓度的 RA 和 RA⁃Zn 一起接种在 96 孔板中，并在
培养1、3、5 d后的成骨细胞增殖情况。 37 ℃、120 r/min 条件下孵育 24 h。孵育后，在分光
1.2.6 ABTS法检测RA和RA⁃Zn的抗氧化活性 光度计中测量600 nm处的吸光度值。
分别取 10 μL 200 μmol/L 的 RA 和 RA⁃Zn 与 1.3 统计学方法
170 μL ABTS 工作溶液反应 6 min。用微孔板分光 所有实验数据使用 GraphPad Prism8 和 Origin
光度计测量 414 nm 处的吸光度值。使用浓度为 软件进行分析，计量资料以均数±标准差（x ± s）表
0.15~1.50 mmol/L 的水溶性维生素E（Trolox）标准溶 示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组
液建立标准曲线，比较样品的抗氧化能力。 间两两比较采用 Tukey’s 或 Dunnett’s 检验。所有

1.2.7 铁还原抗氧化能力（ferric ion reducing antiox⁃ 实验至少重复3次，P < 0.05为差异有统计学意义。
idant power，FRAP）测定检测RA 和RA⁃Zn 的抗氧化
2 结 果
活性
分别取5 μL 200 μmol/L浓度的RA和RA⁃Zn与 2.1 合成的RA⁃Zn的结构
180 μL FRAP 工作溶液反应 5 min。用微孔板分光 RA 是由 1 个羧基、2 个带有邻苯二酚结构的苯
光度计测量 593 nm 处的吸光度值。使用浓度为 环、不饱和碳碳双键和酯基团组成，其中羧基和邻
0.15~1.50 mmol/L 的 FeSO4水溶液建立标准曲线，计 苯二酚结构参与Zn 络合，RA⁃Zn的可能结构如图1
2+
算样品的抗氧化活性。 所示。
1.2.8 最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentra⁃ 2.2 SEM分析
tion，MIC）法检测RA和RA⁃Zn的抑菌作用 通过 SEM 观察到 RA 结构比较松散，RA⁃Zn 则
采用MIC 法研究了RA 和RA⁃Zn 对金黄色葡萄 形成更大更均匀的晶体（图2）。

RA RA⁃Zn
HO
O
O
O HO
OH O OH
O OH O O O
ZnCl2 Zn OH
HO OH HO O O O O
OH OH
OH
图1 RA⁃Zn配合物的合成
Figure 1 Synthesis of RA⁃Zn complex

RA RA⁃Zn RA中羧酸结构参与金属螯合反应。
2.4 紫外⁃可见光谱分析
为了研究RA⁃Zn 的组成，应用了摩尔比法。随
着RA/ Zn 摩尔比的增加，282、326 nm 处的谱带强
2+
度增加，在 374 nm 处又出现了新的谱带（图 4），代
表金属与酚的相互作用，表明邻苯二酚结构参与了

图2 RA和RA⁃Zn的SEM图像 金属离子配位。通过摩尔比法绘制在λ=374 nm 处
Figure 2 SEM images of RA and RA⁃Zn 的不同摩尔比RA/Zn的吸光度曲线。RA/Zn的比例
接近2，证明两者的摩尔比为2。

2.3 红外光谱分析 2.5 细胞增殖活力分析
RA 的红外吸收光谱中观察到羧酸的⁃OH 在 观察4种多酚作用第1天和第3天影响MC3T3⁃E1
3 514~3 160 cm 内（图3），而在RA⁃Zn中减少，表明羧 细胞增殖的情况，结果表明 1×10 mol/L 的 RA 促进
-4
-1
酸的羧基参与RA⁃Zn络合。在RA光谱中1 725 cm -1 细胞增殖的作用最明显（图5A），优于其他 3 种多酚
处代表羧基振动的谱带在RA⁃Zn 中消失，同样提示 （漆黄素、荭草苷、丹参酚酸 B），作用第 5 天RA⁃Zn