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第44卷第4期
               ·470 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2024年4月


              have a promoting effect on the pathogenesis of lupus in mice.
             ［Key words］ systemic lupus erythematosus；S100A9 gene；pristane
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2024，44（04）：469⁃474］







                  系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，        （上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。PCR 仪
              SLE）是一种自身免疫性疾病，其特征是对自身抗原                         （QuantStudio 6 Flex，美国应用生物系统公司）；荧
                                                                            TM
              的耐受性丧失、自身抗体的过度产生、补体激活和                            光显微镜（南京奥力科学仪器有限公司）。
              免疫复合物沉积，并引起多器官功能的损伤                     ［1-3］ ，其       B6小鼠购自南京大学模式动物研究所，S100A9
              病因尚不完全明确，目前认为可由多种因素诱发。                            基因敲除（S100A9 ）的 B6 小鼠［动物许可证号
                                                                                  -/-
              SLE 的小鼠模型有自发性和诱导型。姥鲛烷（pris⁃                       SYXK（苏）2019⁃0059］由南京医科大学鼓楼临床医
              tane）是常用的SLE小鼠模型诱导剂，它是一种烯烃                        学院风湿免疫科提供。所有小鼠均在南京医科大
              类化合物，化学名为 2，6，10，14⁃四甲基十五烷，可                      学鼓楼临床医学院动物中心SPF级环境中饲养。本
              来源于石油或海洋生物，具有细胞毒性，可诱导细                            研究获得南京医科大学鼓楼临床医学院动物保护
              胞凋亡，向不同品系小鼠腹腔注射姥鲛烷会导致狼                            伦理委员批准（20190503）。
              疮样自身免疫综合征，类似人类 SLE 症状。因此姥                         1.2 方法
              鲛烷常作为诱导剂建立狼疮小鼠模型                 ［4-5］ 。          1.2.1 实验动物分组
                                                                                                       -/-
                  S100A9又被称为髓相关蛋白l4（myeloid⁃related                  正常B6 小鼠及S100A9基因敲除（S100A9 ）的 B6
              proteins 14，MRP14），是属于S100钙调素家族的Ca           2+   小鼠各 10 只，体重为 16~20 g，所有小鼠均为雌性。
              结合蛋白。S100A9主要来源于免疫细胞，如中性粒                         5只野生型和5只S100A9 B6小鼠予一次性腹腔注
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              细胞、单核细胞、巨噬细胞。近年来多数研究表明，                           射 0.5 mL 姥鲛烷，作为两组狼疮模型小鼠，分别为
              S100A9 在创伤、感染、应激及炎症中显著上调                  ［6-7］ ，  B6+pristane 组和 S100A9 B6+pristane 组；另外 5 只
                                                                                      -/-
              在类风湿性关节炎、干燥综合征及 SLE 等自身免疫                         B6 小鼠野生型和 5 只 S100A9 B6 小鼠予一次性腹
                                                                                           -/-
              性疾病患者体内也呈现较高水平                ［7-9］ 。狼疮性肾炎        腔注射 0.5 mL 生理盐水，作为两组对照组，分别为
             （lupus nephritis，LN）是 SLE 中较为严重的一种并发               B6组和S100A9 B6组。6个月后，处死所有小鼠。
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              症，发生率达 30%，影响患者的治疗效果和预后。                          1.2.2 测量小鼠脾脏重量和长度
              有报道显示，S100A9蛋白与SLE患者肾损害的活动                             处死小鼠后取各组小鼠的脾脏，记录小鼠脾脏
              性相关   ［10］ 。但是，S100A9的具体作用尚不清楚。为                  重量和长度。
              了进一步探索S100A9蛋白在SLE及LN发生发展中                        1.2.3 小鼠尿蛋白检测
              扮演的角色，本研究建立了动物模型，系统比较了                                 采用Bradford蛋白含量检测试剂盒检测小鼠尿
              姥鲛烷诱导野生型和 S100A9 基因敲除 C57BL/6                     蛋白。具体步骤如下：取各组小鼠尿液，稀释样品，
             （B6）小鼠的自身抗体、肾功能、肾脏病理等 LN 症                         稀释液总体积为 5 μL，加入考马斯亮蓝 G⁃250 溶液
              状，旨在阐明 S100A9 在 SLE 中的具体作用，也期望                    195 μL，充分混匀，放置2 min后，以标准曲线0号管
              为LN的诊断和疗效判定寻找新的生物学标志物。                            做参比，在595 nm波长下比色，记录吸光值，绘制标
                                                                准曲线并计算相应的蛋白质含量。
              1  材料和方法
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              1.1  材料                                                应用肌酐测定试剂盒检测小鼠血清肌酐。具
                  血清IgG 检测试剂盒（Ebioscience公司，美国）；                体方法如下：取各组小鼠血清，96 孔酶标板中加入

              姥鲛烷（Sigma 公司，美国）；抗双链 DNA（double⁃                  6 μL 样本，每孔加入 180 μL 酶溶液 A，37 ℃孵育 5
              stranded DNA，dsDNA）抗体检测试剂盒（湖南艾方                   min，546 nm波长测定吸光度值A1，然后向每孔中加
              生物科技有限公司）；肌酐、尿素氮检测试剂盒（南                           入60 μL酶溶液B，37 ℃孵育5 min，546 nm波长测定
              京建成生物工程研究所），Bradford蛋白含量检测试                       吸光度 A2，计算两次测定吸光度值的差值ΔA=A2-

              剂盒（南京凯基生物技术有限公司），Triton⁃X⁃100                     A1，按公式计算肌酐含量（μmol/L）=（ΔA 测定-ΔA 空白）/
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