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第44卷第4期 陈佳丽，夏 天，周其冈. 检测蛋白质相互作用方法的进展［J］.
2024年4月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（04）：536-545 ·537 ·

上相互靠近从而激活下游报告基因的转录（图1）。 体免疫沉淀 X，那么在体内与 X 偶联的蛋白质 Y 也
Y2H 系统广泛用于检测不同物种中任何两种 能被沉淀下来，从而形成抗体⁃蛋白质X⁃蛋白质Y的
蛋白质之间的物理相互作用 ［10］ ，具有高度敏感性， 三元或多元复合物。洗涤掉与蛋白质X没有相互作
应用广泛。 Sun 等 ［11］ 使用 Y2H 系统鉴定出与沙眼 用的蛋白后，再用洗脱液将互作蛋白复合物从珠子
衣原糖原合酶相互作用的 HeLa 细胞蛋白，Shi 等 ［12］ （Beads）上洗脱下来，便得到免疫共沉淀产物（图
通过Y2H系统鉴定了小鼠精子发生过程中与cAMP 2），产物既可用 Western blot 检测已知蛋白，也可用
依赖性蛋白激酶（cAMP⁃dependent protein kinase， 质谱技术鉴定未知蛋白 。
［19］
PKA）调节亚基Ⅰα（regulatory subunit Ⅰ α，RIα）相 Co⁃IP技术使用非变性剂裂解细胞，细胞内存在
互作用的蛋白，Omagari 等 ［13］ 使用 Y2H 测定法评估 的PPI被最大限度地保留下来。基于抗原抗体原理

了 691 种化合物拮抗人甲状腺受体（the human thy⁃ 的Co⁃IP技术可以比较准确地检测出与目的蛋白相
roid receptor，hTR）的活性。Y2H系统的一个常见问 互作用的蛋白质，如 Jia 等 ［20］ 联用 Co⁃IP 与质谱技术
题是Y2H诱导的报告基因的自动激活，导致结果可 （Co⁃IP/MS），鉴定出23种与母羊卵巢提取物中FecB
能存在高假阳性 ［14］ ，因为当某些蛋白质本身可以激 特异性作用的蛋白质。但是 Co⁃IP 也有其局限性：
活Y2H报告基因转录时，无论是否存在任何PPI，都 无法判断 PPI 是直接还是间接的，且不能分辨瞬时
会激活报告基因，从而产生阳性结果 。 作用和低亲和力的PPI。
［15］
1.2 免疫共沉淀（co⁃immunoprecipitation，Co⁃IP） 1.3 Pull⁃down
Co⁃IP 实验可以通过直接或间接的方式识别 Pull⁃down 实验适用于检查两种纯化蛋白质之
PPI ［16］ 。Co⁃IP 是根据抗原和抗体特异性结合的原 间的直接PPI并评估亲和力的程度 ［21］ 。谷胱甘肽⁃S⁃
理 ［17］ ，当细胞在非变性条件下被裂解时 ［18］ ，细胞内 转移酶（glutathione⁃S⁃transferase，GST）蛋白是一种
存在的许多PPI被保留下来。如果用蛋白质X的抗 广泛使用的亲和标签 ［22］ ，GST Pull⁃down实验是利用

Yeast cell

Expression of fusion proteins AD

BD X Y
X
Transcription
BD
Promoter Reporter gene
AD Y

图1 酵母双杂交原理
Figure 1 Principle of yeast two⁃hybrid

Antibody
Protein X（Antigen）
Beads Protein A/G
Protein Y
Beads Protein A/G

Beads Protein A/G

Cell lysate

图2 免疫共沉淀原理
Figure Principle of co⁃immunoprecipitation