Page 27 - 南京医科大学自然版

第44卷第5期 南京医科大学学报（自然科学版）
2024年5月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·615 ·

·基础研究·

热休克蛋白A12A对内毒素血症肝损伤的作用及机制研究

王诏鹤，孔秋月，丁正年 *
南京医科大学第一附属医院麻醉与围术期医学科，江苏 南京 210029

［摘 要］ 目的：研究热休克蛋白A12A（heat shock protein A12A，HSPA12A）对内毒素血症肝损伤的影响及机制。方法：①采
用脓毒症小鼠肝组织RNA 测序的公共数据库，以生物信息学手段分析Hspa12a和多种载脂蛋白的mRNA 表达变化。②采用
6~8 周龄 Hspa12a 基因敲除（Hspa12a knockout，Hspa12a ）鼠和野生型（wild type，WT）鼠，腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，
-/-
LPS）5 mg/kg诱导内毒素血症，以生理盐水（normal saline，NS）注射小鼠为对照组，分为NS⁃WT组、NS⁃Hspa12a 组、LPS⁃WT组
-/-
和 LPS⁃Hspa12a 组；LPS 作用 6 h 后，收集肝组织，HE 染色观察肝脏组织病理变化；免疫印迹和 RT⁃PCR 分析其中 HSPA12A、
-/-
ApoA1、ApoB、ApoM表达水平；分离血清，测定肝功能标志物丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）和天冬氨酸氨基
转移酶（aspartate aminotransferase，AST）水平以及高密度脂蛋白胆固醇（high⁃density lipoprotein cholesterol，HDL⁃C）和低密度脂蛋
白胆固醇（low⁃density lipoprotein cholesterol，LDL⁃C）水平。③WT鼠原代肝细胞过表达Hspa12a后，使用LPS（500 ng/mL）作用于
肝细胞模拟内毒素血症肝损伤模型，6 h后检测肝细胞培养上清的ALT和AST水平。④根据是否发生脓毒症肝损伤将患者分
为脓毒症肝损伤组和对照组，比较两组患者ALT、AST、HDL⁃C和LDL⁃C的差异。结果：①生物信息学分析显示，脓毒症小鼠肝
脏Hspa12a、Apoa1、Apob和Apom的mRNA表达下降。②与NS⁃WT组相比，LPS⁃WT组肝组织出现明显损伤（P < 0.001）、炎症病
灶数量增多（P < 0.01）、血清 ALT（P < 0.05）和 AST（P < 0.01）升高，同时肝组织中 HSPA12A 表达显著下降（P < 0.05）；而与
LPS⁃WT组相比，LPS⁃Hspa12a 组肝脏病理变化更严重（P < 0.05）且血清ALT（P < 0.01）和AST（P < 0.05）水平升高，HDL⁃C 和
-/-
LDL⁃C水平下降（P < 0.01），肝组织载脂蛋白（ApoA1、ApoB、ApoM）表达降低（P < 0.05，P < 0.01）。③体外实验中 LPS 作用使
肝细胞培养上清中ALT和AST水平升高（P < 0.001），而过表达Hspa12a能够减轻LPS作用引起的ALT和AST水平升高（P < 0.01）。
④临床数据显示，出现脓毒症肝损伤的患者血浆中ALT和AST水平相比对照组显著升高（P < 0.001），HDL⁃C和LDL⁃C水平显著
下降（P < 0.001）。结论：内毒素血症导致肝脏HSPA12A表达下调，其介导了内毒素血症肝损伤的发生，过表达Hspa12a能够保
护内毒素血症引起的肝损伤，该作用可能与维持肝脏载脂蛋白及脂蛋白稳态有关。
［关键词］ 热休克蛋白A12A；内毒素血症；肝损伤；载脂蛋白
［中图分类号］ R631.1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2024）05⁃615⁃11
doi：10.7655/NYDXBNSN231186

Study on the role and mechanism of heat shock protein A12A in hepatic injury induced by
endotoxemia

WANG Zhaohe，KONG Qiuyue，DING Zhengnian *
Department of Anesthesiology and Perioperative Medicine，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，
Nanjing 210029，China

［Abstract］ Objective：To explore the role and mechanism of heat shock protein A12A（HSPA12A）in hepatic injury induced by
endotoxemia. Methods：①The mRNA expression changes of Hspa12a and multiple apolipoproteins were analyzed by bioinformatics
using a public database of RNA sequencing results from septic mice liver tissue. ② Endotoxemia was induced by intraperitoneal
-/-
injection of lipopolysaccharide（LPS，5 mg/kg）using 6-8⁃week⁃old Hspa12a knockout（Hspa12a ）mice and wild⁃type（WT）mice.
Mice treated with normal saline（NS）served as controls. Animals were divided into four groups，NS⁃WT group，NS⁃Hspa12a group，
-/-
-/-
LPS⁃WT group，and LPS⁃Hspa12a group. Six hours after LPS treatment，liver tissues were collected to evaluate the tissue damage by
HE and analyze the expression levels of HSPA12A，ApoA1，ApoB，and ApoM by immunoblotting and RT⁃PCR. Serum was separated

［基金项目］ 江苏省自然科学基金（BK20201087）
∗
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：zhengnianding@njmu.edu.cn