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第44卷第6期
·862 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年6月
（［2020］KY213⁃01），所有参与者均签署知情同意。 tric oxide，NO）分析仪（无锡尚沃公司）进行FeNO和
1.2 方法 FnNO测定。FeNO测定：利用过滤器吸气2~3 s达肺
1.2.1 采集血液样本 总量，然后以 50 mL/s 的呼气流速缓慢呼气，使呼出
患者和健康者的静脉外周血使用EDTA抗凝管收 气到达一个稳定的平台期。FnNO测定：将1个带有
集，共采集10 mL外周血，其中5 mL离心机3 000 r/min 中央管腔的鼻呼头堵住一侧鼻孔，并连接导管抽吸
离心10 min，分离血浆，使用ELISA试剂盒检测PARP⁃1 鼻腔内气体，流速维持在5 mL/s，测试过程中受试者
蛋白水平；另留存 5 mL 全血用于 RT⁃qPCR 测定 持续吹口哨保证腭咽闭合。采样完成后仪器自动
miR⁃21 的 mRNA 表达水平。所有血液样本均储存 显示测量数值。
于-80 ℃。 1.3 统计学方法
1.2.2 ELISA测定 统 计 软 件 SPSS21.0 用 于 统 计 分 析 ，图 像 由
根据制造商的说明，使用 ELISA 试剂盒（上海 GraphPad Prism7 绘制。采用 Kolmogorov⁃Smirnov 检
科兴公司）测量血浆样品中 PARP⁃1 的总浓度。在 验测量数据的正态性。符合正态分布的测量数据
450 nm处获得标准品和样品的吸光度值，并比较为 表示为均数±标准差（x ± s），多组间比较采用单因
每种测定构建的标准曲线。 素方差分析，并进行LSD多重t检验；不符合正态分
1.2.3 RT⁃qPCR检测 布的测量数据用中位数（四分位数）［M（P25，P75）］表
总 RNA 的提取使用全血总 RNA 提取试剂盒 示，多组间比较采用K⁃W检验，Bonfferoni法进行事后
（北京汇天东方公司），根据说明书的步骤进行实 多重比较。分类变量数据表示为比值，使用χ 检验对
2
验。提取总 RNA 后进行浓度及纯度的检测。本研 二分类变量进行分析。采用Pearson相关分析（正态
究使用第一链cDNA合成试剂盒（南京诺唯赞公司） 分布数据）进行相关性分析。采用受试者工作特征
合 成 第 一 链 互 补 DNA。 使 用 AceQ qPCR SYBR （receiver operating characteristic，ROC）曲线确定诊断
Green Master Mix（南京诺唯赞公司）进行RT⁃qPCR， 的灵敏度和特异度，曲线下面积（area under curve，
以评估 RNA 表达的程度。采用 2 -ΔΔCT 法对结果进行 AUC）评价miR⁃21和PARP⁃1诊断AR或CARAS的准
相对定量分析。引物由苏州吉玛公司提供。引物 确度。P < 0.05为差异有统计学意义。
序列如下：miR⁃21（sense，5′⁃TCGCCCGTAGCTTAT⁃
2 结 果
CAGACT ⁃ 3′ ；antisense，5′ ⁃ TCGCCCGTAGCTTAT⁃
CAGACTA⁃3′）；PARP⁃1（sense，5′⁃CCCCACGAC⁃ 2.1 研究对象的临床特征
TTTGGGATGAA⁃3′；antisense，5′⁃AGACTGTAGGC⁃ 44例CARAS患者、31例AR患者和42例健康志
CACCTCGAT⁃3′）；β⁃actin（sense，5′⁃CGTGGACAT⁃ 愿者性别、年龄、吸烟史、FnNO水平差异无统计学意
CCGCAAAGA⁃3′；antisense，5′⁃GAAGG⁃TGGACAGC⁃ 义。与健康对照组相比，AR 和 CARAS 患者过敏史
GAGGC⁃3ʹ）。 差异有统计学意义，且 AR 组和 CARAS 组 EOS计数
1.2.4 肺功能的测定 较高。CARAS组1秒钟用力呼气量占预计值百分比
根据 2019 年肺活量测定标准 ［18］ 进行肺功能检 （forced expiratory volume in one sec percent predicted，
查。肺活量仪器（Jaeger公司，德国）用于记录患者坐 FEV1% pred）和FEV1/FVC与健康对照组和AR组相比均
位的肺功能测试结果。在整个测试过程中持续观察 较高，FeNO 水平与健康对照组和 AR 组相比均较
体积和流量曲线。测量用力肺活量（forced vital 高。研究对象的临床特征见表1。
capacity，FVC）、1 秒钟用力呼气量（forced expiratory 2.2 CARAS 患者、AR 患者与健康对照组的外周血
volume in one second，FEV1）和FEV1/FVC以及其他肺 miR⁃21和血浆PARP⁃1的表达水平
功能测试参数并计算预期值。记录3次适当的测量， RT⁃qPCR结果显示，与健康对照组相比，外周血
最高值被认为是基值，FVC和FEV1的最佳值和次佳 miR⁃21表达在CARAS 组患者中明显升高，差异有
值之间的差异 < 0.10 L。 统计学意义，此外，AR 组和健康对照组、AR 组和
1.2.5 呼出气一氧化氮（fractional exhaled nitric ox⁃ CARAS 组的 miR⁃21 表达水平差异无统计学意义
ide，FeNO）和鼻呼气一氧化氮（fractional nasal nitric （图 1A）。ELISA结果显示，AR组患者中PARP⁃1 的
oxide，FnNO）测定 水平较 CARAS 组和健康对照组升高，差异有统计
所有受试者均在专人指导下使用一氧化氮（ni⁃ 学意义（图 1B），健康对照组和 CARAS 组的差异无
