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第44卷第8期
·1052 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年8月

RUNX2，Osteocalcin and Osteopontin（P < 0.05）. Under normoxia and differentiation culture conditions，1.00% CPO ⁃ PCL
microparticles increased the production of ALP and calcium nodules，and CPO⁃PCL microparticles of 0.50% and 1.00% concentrations
promoted the expression levels of RUNX2 and Osteocalcin proteins（P < 0.001）. Under normoxia and normal culture conditions，0.50%
and 1.00% CPO⁃PCL microparticles up⁃regulated RUNX2，Osteocalcin and Osteopontin expression levels（P < 0.05），but rarely affect
osteoblast differentiation. Conclusion：CPO ⁃ PCL microparticles of 1.00% promote the proliferation and bone differentiation of
ADMSCs in vitro under hypoxia and osteogenic differentiation culture.
［Key words］ CPO⁃PCL microparticles；ADMSC；osteogenic differentiation；cell proliferation；hypoxia
［J Nanjing Med Univ，2024，44（08）：1051⁃1061］

大段骨缺损是骨科修复面临的重大难题，随着 Sigma⁃Aldrich公司，美国）；抗核心转录因子⁃2（Runt
骨组织工程的不断深入研究和发展，人工合成的生 ⁃related transcription factor 2，RUNX2）抗体、抗骨钙
［1］
物材料现已逐步成为可以替代骨组织的植入物 。 素（Osteocalcin）抗体、抗骨桥蛋白（Osteopontin）抗
目前用于临床的生物材料兼具多种理化性质和生 体、荧光标记的抗免IgG（Cell Signal Technology公司，
［2］
物性能，是组织工程的基础 。骨组织工程包含干 美国）；碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）检测
细胞或前体细胞、生物支架和生长因子三要素，其 试剂盒（P0321S）、茜素红染色试剂盒（C0148S）（上海
核心在于通过植入生物材料、活化种子细胞在内的 碧云天公司）；Trizol（119704，Ambion公司，美国）、异
三维结构复合体，构建具有生物活性和功能的组 丙醇（2015122801，成都市科龙化工试剂厂）；反转
织，重塑缺损的组织形态，从而恢复功能结构 ［3-4］ 。 录试剂盒（AK22 355A）、荧光定量 Polymerase Chain
多种生物材料有利于促进细胞黏附、生长和分化， Reaction（PCR）试剂盒（AK31 128A）（Takara公司，日
如促进人脂肪间充质干细胞（adipose⁃derived mesen⁃ 本）。电镜（JEM⁃F200，宁波欧普仪器有限公司），紫
chymal stem cell，ADMSC）的成骨分化，发挥引导组 外分光光度计（Alpha⁃1900，上海谱元仪器有限公
［5］
织再生的作用 。本课题组设计并制备了一种新型 司），StepOnePlus 荧光定量 PCR 仪（ABI 公司，美
的产氧性生物材料——聚己内酯（polycaprolactone， 国），Centrifuge 5810R 型离心机（Eppendorf 公司，德
PCL）包 载 过 氧 化 钙（calcium peroxide，CPO）的 国），TP1020⁃1 型组织脱水机、EG1150 型石蜡包埋
CPO⁃PCL 微粒，目前已被证实其能持续可控地产 机、RM2235型石蜡切片机（莱卡公司，德国）。荧光
氧，本研究为了进一步探究该材料的生物效能，检 显微镜（EVOS M7000，上海赛默飞公司）。
测CPO⁃PCL微粒在不同氧环境下对ADMSC成骨分 1.2 方法
化的影响。 1.2.1 CPO⁃PCL微粒制备
10% PCL 溶液制备：称取 PCL 10 g，加入 90 mL
1 材料和方法
二氯甲烷溶液内，充分溶解，将溶液置于试剂瓶中
1.1 材料 密封备用。1% 明胶溶液制备：称取明胶粉末2 g，加
清洁级雄性 Sprague⁃Dawley（SD）大鼠 30 只，体 入 298 mL 去离子水溶液内，充分溶解，将溶液置于
重（120±10）g，由浙江省实验动物中心提供（实验动 试剂瓶中密封备用。3% CPO制备：称取CPO 3 g，加
物生产许可证号：SYXK（浙）2016⁃0022），饲养于浙 入 97 mL去离子水溶液内，充分溶解，将溶液置于试
江省中医药研究院实验动物中心，温度（22±2）℃，湿 剂瓶中密封备用。量取1 mL 3% CPO溶液，将其加入
度 50%~60%，12 h 昼夜节律饲养，实验动物使用许 到10 mL 10% PCL溶液中，对溶液进行30 kHz超声波
可证号：SYXK（浙）2019⁃0010。普通饲料为实验动 乳化处理20 min。向乳化后的混合溶液中加入1%的
物标准饲料，由浙江省中医药研究院实验动物中心 明胶 150 mL，对溶液进行 30 kHz 超声波乳化处理
提供。所有动物使用符合3R原则，并且经宁波大学 30 min。将最终乳化后的混合液置于加热磁力搅
实验动物伦理委员会批准（伦理号：2020⁃159）。 拌器内，在 60 ℃下加热搅拌 6 h，再将得到的混合
成 骨 分 化 培 养 基（PD⁃033）和 正 常 培 养 基 液 3 000 r/min 离心 10 min，弃上清液，向沉淀中加
（CM⁃H202）（武汉普诺赛公司）；PCL（P299385）、 入 20 mL 甲醇，震荡 30 s 后静置 10 min，重复 3 次，
CPO（C111789）（上海阿拉丁公司），明胶（1288485， 5 000 r/min 离心 20 min，弃上清液，再加入 20 mL 甲