Page 25 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第12期 高健成，陆晨飞，张梓枫，等. 胶质瘤干细胞来源的外泌体促进胶质瘤恶性进展［J］.
2022年12月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（12）：1658-1663 ·1661 ·

A B C
收集细胞上清 DGC GSC DGC GSC
CD9 22 kDa
4 ℃，3 000 g，离心10 min
TSG101 50 kDa
1 mL上清加250 μL外泌体分离试剂，混匀

混匀液4 ℃静置2 h
D
100 100
DGC GSC
4 ℃，12 000 g，离心20 min 80 80
Events 60 Events 60
弃上清，PBS重悬外泌体沉淀 40 40
20 20
0 0
0 50 100 150 200 250 0 50 100 150 200 250
粒径（nm） 粒径（nm）
A：胶质瘤干细胞和分化肿瘤细胞培养上清外泌体的提取流程；B：透射电镜观察细胞上清外泌体形态学特征；C：免疫印迹法检测 CD9、
TSG101蛋白表达；D：纳米颗粒跟踪分析，检测外泌体粒径和数量。
图2 胶质瘤干细胞和分化肿瘤细胞上清外泌体的提取和鉴定
Figure 2 Extraction and identification of exosomes from the supernatant of glioblastoma stem cells and differentiated tu⁃
mor cells

2.4 GSC EV促进胶质瘤体内生长 理下，与 DGC EV 处理过的 U87 细胞相比，GSC EV
为进一步探究GSC EV 对胶质瘤细胞恶性表型 处理过的 U87 细胞体内生长能力也相应增强，及其
的体内调控作用，使用外泌体连续处理U87细胞7 d 荷瘤鼠生存时间相应减少（图 4A~C）。免疫组织
后，原位种植于小鼠大脑。与 DGC EV 处理过的 化学染色结果显示，GSC EV 促进 U87 细胞增殖指
U87细胞相比，小鼠活体成像显示GSC EV处理过的 标 Ki⁃67 表达上升，凋亡指标 cleaved caspase⁃3 表达
U87细胞体内肿瘤体积明显增大。荷瘤小鼠生存曲 减弱（图 4D）。以上实验结果提示，GSC 来源的 EV
线表明，GSC EV处理过的U87细胞原位成瘤的小鼠 可显著提高U87细胞体内生长和TMZ耐药能力，降
生存时间明显缩短（图4A~C）。另外在TMZ治疗处 低小鼠存活时间和TMZ治疗效果。

A B
8 U87 DGC EV DGC EV GSC EV 250 U87
GSC EV **
** 200
6
nm ） ** 150
（ 450 4 克隆数 100
D
2
50
0 0
1 2 3 DGC EV GSC EV
Days
C D
DGC EV GSC EV 150 U87
100 DGC EV
** GSC EV
** （ % ） ** **
侵袭细胞数 50 细胞活力 50
100

0
0 0 25 50 100 200 400
DGC EV GSC EV
200 μm TMZ（μmol/L）
A：CCK8法检测DGC EV和GSC EV刺激后U87增殖能力；B：克隆形成实验检测DGC EV和GSC EV刺激后U87增殖能力；C：Transwell实验检
测DGC EV和GSC EV刺激后U87侵袭能力；D：CCK8法检测DGC EV和GSC EV刺激后U87的TMZ耐药能力。与DGCEV比较，P＜0.001。
**
图3 DGC EVs和GSC EVs对U87增殖和侵袭能力的影响
Figure 3 Effects of DGC EVs and GSC EVs on U87 proliferation and invasion ability