Page 26 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第12期
·1662 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年12月

A B C
DGC EV GSC EV 25 ** 100 DGC EV
（ p/s ） 1×10 6 ） （ 15 （ % ） 50 GSC EV
TMZ - + - + 20 ** DGC EV+TMZ
GSC EV+TMZ
Total Flux 10 5 生存率

0 0 0 20 40 60
GSCEV+TMZ
DGC EV+TMZ
DGC EV GSC EV 生存时间（d）

D
DGC EV GSC EV
TMZ - + - +

ki⁃67

cleaved caspase⁃3

50 μm
A、B：活体成像检测DGC EV和GSC EV处理后U87细胞的TMZ耐药能力；C：小鼠生存曲线分析DGC EV和GSC EV处理后荷瘤鼠的生存
时间；D：免疫组化检测增殖指标Ki⁃67和凋亡指标cleaved caspase⁃3。两组比较，P＜0.01。
**
图4 GSC EV增强U87细胞体内恶性表型
Figure 4 GSC EV enhance the malignant phenotype of U87 cells in vivo

胞和其周围环境的相互调节，促进肿瘤细胞的生
3 讨 论
长、侵袭和转移，在肿瘤的发生和进展中发挥了重
肿瘤微环境（tumor microenvironment，TME）是 要作用 ［11-12］ 。如EV通过传递非编码 RNA（miR⁃21）
由肿瘤细胞、常驻和招募的细胞（与癌症相关的基 来诱导肿瘤细胞的免疫逃逸，从而促肝癌进展 ［13］ 。
质细胞和免疫细胞）、以及相应细胞的分泌产物（如 乳腺癌相关巨噬细胞通过EV的内含物长链非编码
细胞因子、趋化因子）和细胞外基质中的非细胞成 RNA HISLA，来增强乳腺癌细胞的有氧糖酵解和细
分等组成 。胶质瘤微环境中细胞成分主要由 胞抗凋亡能力 ［14］ 。另外，EV与胰腺癌的发生发展密
［8］
GSC、DGC、胶质细胞、神经元、内皮细胞、巨噬细胞、 切相关，是胰腺癌潜在的生物标志物、治疗靶点和
树突状细胞等组成。DGC 通常被认为是 GSC 来源 治疗药物的载体 ［15］ 。本研究发现，比 DGC 来源的
的终末分化状态，相比在 GBM 组织中含量更多的 EV，GSC 来源的 EV 可显著地增加胶质瘤细胞的增
DGC，含量更低的 GSC 被认为在胶质瘤的异质性、 殖、侵袭和TMZ 的耐药能力，提示 GSC 分泌的外泌
血管生成、化疗和放疗抵抗以及复发中发挥到更为 体具有更强的生物学效应。国内学者也发现，在
重要的作用 。因此，胶质瘤干细胞既是现存治疗困 缺氧条件下，GBM 分泌的外泌体可以通过改变周
［9］
难的主要驱动因素，也是我们未来寻求更有效治疗方 围内皮细胞的表型来诱导血管生成，进而促进GBM
案的潜在靶点。本研究选用 GBM 患者来源的原代 进展 ［16］ 。
GSC，通过细胞分化实验获得对应的GSC和DGC，以 EV的体积很小并且不稳定，因而如何高效分离
探寻GSC和DGC在体内外作用的差异。 和提取细胞上清外泌体也是亟需解决的问题。目
EV是一种细胞外囊泡，大小通常在20~100 nm， 前分离和提取 EV 的方法主要有超速离心法、免疫
在体内可由多种细胞分泌，如T细胞、神经细胞和肿 磁珠法、PEG沉淀法、试剂盒法 ［17-18］ 。超速离心法是
瘤细胞等 ［10］ 。越来越多的研究发现，EV参与肿瘤细 EV 提取最常用的方法，方法简便，获得EV 量多，但