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第44卷第12期 赵辰希，徐 聪，谢思远，等. 4⁃羟基过氧环磷酰胺通过靶向P53损伤人卵巢颗粒细胞线粒体自噬
2024年12月 功能的研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（12）：1629-1637 ·1633 ·

减少环磷酰胺临床治疗不良反应并开发新的防治 著性升高（图2C~F，P均< 0.001）。因此，4⁃HC可能抑
疗手段具有重要意义。线粒体是卵巢中最重要的 制了卵巢颗粒细胞中的线粒体自噬，使得受损线粒
细胞器。为研究4⁃HC损伤与线粒体是否相关，使用 体增加，阻碍了线粒体的正常功能。
JC⁃1 检测线粒体膜电位，分为 DMSO 组和 4⁃HC 组， 2.3 P53 蛋白在 4⁃HC 损伤的卵巢颗粒细胞胞质中
结果显示，与 DMSO 组相比，4⁃HC 组的线粒体膜电 累积
位显著下降（图 2A，P < 0.05），表明 4⁃HC 可能损伤 P53作为调控颗粒细胞凋亡的重要因子，在线粒
了SVOG的线粒体功能。利用透射电镜对各组的线 体自噬中也发挥着不可或缺的作用。为研究4⁃HC抑
粒体超微结构进行观察，结果显示，与 DMSO 组相 制线粒体自噬的机制，检测了各组 P53 的表达水
比，4⁃HC 组的线粒体异常肿胀，线粒体嵴变形且空 平。免疫荧光结果显示，4⁃HC组中P53的荧光强度
泡化严重，细胞内受损线粒体明显增多（图 2B），表 明显增加，且胞质中更为显著（P < 0.05），DMSO 组
明线粒体受到损伤并提示线粒体自噬可能受到阻 中 P53 低表达，且细胞核中表达较多（图 3A）。WB
碍。进一步对各组的线粒体自噬通量进行检测， 结果表示，4⁃HC 组中 P53 的表达水平较 DMSO 组显
RF⁃qPCR 和 WB 结果显示，与 DMSO 相比，4⁃HC 组 著增加；MDM2 是一种通过结合 P53 并促进其降解
的 Parkin、Pink1 以及 P62 的 mRNA 和蛋白表达均显 的蛋白质，4⁃HC 组中 MDM2 的表达水平显著降低

A B
Aggregator Monomer Merge
Relative intensity of mitochondria 4 2 0

DMSO 8 6 * DMSO

4⁃HC DMSO 4⁃HC 4⁃HC

C D E
3 ** 6 ** 3 2 of P62 *
Relative mRNA expression of Parkin 2 1 Relative mRNA expression of Pink1 4 2 Relative mRNA expression 1

0 0 0
DMSO 4⁃HC DMSO 4⁃HC DMSO 4⁃HC
F DMSO 4⁃HC 1.5 *** 1.6 * 1.8 *
Relative intensity of Parkin 1.2 Relative intensity of Pink1 1.2 Relative intensity of P62 1.2
β⁃actin 42 kDa 1.4 1.4 1.6
Parkin 52 kDa 1.3 1.4
Pink1 63 kDa 1.1 1.0 1.0
1.0
P62 62 kDa 0.9 0.8 0.8
DMSO 4⁃HC DMSO 4⁃HC DMSO 4⁃HC
A：JC⁃1 fluorescence signal in SVOG cells（scale bars=100 μm）. B：Characteristic TEM images of mitochondria in SVOG cells. The blue arrows
represent normal mitochondria，the red arrows represent damaged mitochondria，and the asterisks represent the cell nucleus（scale bars=200 nm）. C-E：
The relative mRNA expression levels of Parkin（C），Pink1（D）and P62（E）in SVOG cells were measured by RT⁃qPCR. F：Western blot detection of au⁃
*
**
tophagy⁃related proteins. P < 0.05，P < 0.01，and *** P < 0.001（n=3）.
图2 在4⁃HC损伤的SVOG细胞中线粒体自噬受到抑制
Figure 2 The mitophagy was inhibited in SVOG cells damaged by 4⁃HC