Page 46 - 南京医科大学自然版

第44卷第12期
·1660 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年12月

Realtive miR⁃146a expression 1 000 Realtive miR⁃146a expression 1.5
A 800 P < 0.001 P < 0.001 C P < 0.01 P < 0.001

1.0
600
400
0.5
200
2.0
1.5
1.0
0.5
0 0
Blank miR⁃146a mimic NC Blank miR⁃146a inhibitor NC
B miR⁃146a D miR⁃146a
Blank mimic NC Blank inhibitor NC
TRAF6 59 kDa TRAF6 59 kDa

β⁃actin 43 kDa β⁃actin 43 kDa
2.0 4
P < 0.05 P < 0.05
expression 1.5 P < 0.01 P < 0.001 expression 3

Realtive TRAF6 1.0 Realtive TRAF6 2 1

0.5

0 0
Blank miR⁃146a mimic NC Blank miR⁃146a inhibitor NC
A，B：Macrophages were transfected with miR⁃146a mimic or its negative control（NC）. The expression of miR⁃146a was detected by qPCR（A），and
the expression of TRAF6 was detected by Western blot（B）. C，D：Macrophages were transfected with miR⁃146a inhibitor or its negative control（NC），and
the expression of miR⁃146a was detected by RT⁃PCR（C），and the expression of TRAF6 was detected by Western blot（D）（n=3）.
图2 miR⁃146a调控TRAF6的表达
Figure 2 Regulation of miR⁃146a in the expression of TRAF6

素⁃1β、白介素⁃6、TNF⁃α以及 ROS 导致器官组织损
A
TRAF6⁃wt 5′⁃ACCGCUCUGGUGUUGAGUUCUCA⁃3′ ［6-8］
伤、坏死 。miRNA 是一种约 23 个核苷酸的非编
mmu⁃miR⁃146 a3′⁃ UUGGGUACCUUAAGUCAAGAGU⁃5′
码小RNA，通过与信使RNA的3′UTR互补进行转录
TRAF6⁃mut 5′⁃ACCGCUCUGGUGUUGCUGGAGAC⁃3′
［9］
后调控 。miRNA 被证明参与几乎所有的生物过
B pmirGLO⁃wt
pmirGLO⁃mut 程，包括细胞增殖、凋亡、分化等，与此同时，大量证
9
P < 0.01 P < 0.05 据表明 miRNA 也可参与免疫系统的过程 ［10-12］ 。本
Realtive luciferase activity 6 3 巨噬细胞缺氧⁃复氧过程中炎症因子及ROS的释放。
研究发现miR⁃146a通过抑制TRAF6的表达，减轻了
缺氧⁃复氧实验是常用的体外缺血再灌注模型 。
［4］
本研究将此模型应用在小鼠巨噬细胞系RAW264.7

达水平以及炎症因子的释放。结果表明，TRAF6的
0 上，以检测缺氧⁃复氧诱导后 miR⁃146a、TRAF6 的表
Blank miR⁃146a mimic NC
表达明显上调，而且通过 ELISA 分析发现炎症因子
A：miR⁃146a binds to the original and mutated 3′ untranslated region
释放也明显增加，然而细胞中miR⁃146a的表达却明
of TRAF6. B：Luciferase expression was measured 24 h after RAW264.7
cells were co⁃transfected with pRL⁃TK，pmirGLO⁃TRAF6⁃WT or pmir⁃ 显下调。提示 miR⁃146a/TRAF6 在巨噬细胞的炎症
GLO⁃TRAF6⁃MUT，miR⁃146a mimic or negative control（NC）（n=3）. 反应中可能起到重要作用，这也与之前的研究报道
图3 miR⁃146a靶向结合TRAF6 相符合 ［13-14］ 。此外，与野生型小鼠相比，敲除 miR⁃
Figure 3 miR⁃146a targeted TRAF6
146a 小鼠骨髓来源的巨噬细胞中 TRAF6 蛋白水平