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第45卷第1期        王 巧，强静超，卞 乐，等. 水晶兰苷通过调节NF⁃κB/NLRP3 炎症小体通路改善脓毒症相关
                  2025年1月            急性肾损伤和功能障碍［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（1）：1-12                     · 3  ·


                ASC）和半胱天冬氨酸蛋白酶 1（Caspase⁃1）组成的                    科技公司）；尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）测定
                复合体。当 NLRP3 炎性小体被激活时，Caspase⁃1                    干片（比色法）和肌酐（creatinine，CRE）测定干片（速
                自我剪切并活化，促进炎症因子（如 IL⁃1β和 IL⁃18）                    率法）试剂盒（奥森多临床诊断公司，美国）；谷胱甘
                的成熟与分泌。研究表明，在脓毒症动物模型中，                            肽（glutathione，GSH）、过氧化氢酶（catalase，CAT）、
                NLRP3炎症小体的表达水平显著上调，并伴随炎症                          总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T⁃AOC）、丙
                              ［7］
                介质的释放增加 。抑制NLRP3炎症小体的激活能                          二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒（南京建成生物
                够减轻炎症反应和组织损伤，保护机体免受脓毒症                            工程研究所）；NLRP3、Caspase⁃1、Cleaved⁃caspase⁃1
                的侵袭。由于 NF⁃κB 通路和 NLRP3 炎症小体在脓                     和β⁃actin一抗（武汉三鹰生物技术有限公司）；核因
                毒症中的关键作用，抑制NF⁃κB/NLRP3炎症小体通                       子κB 抑制蛋白（ihibitor of nuclear factor kappa⁃B，
                路可能成为治疗脓毒症的有效策略。                                  IκBα）和 p⁃NF⁃κB p65 一抗以及辣根过氧化物酶
                    由于天然化合物具有多靶点特性和不良反应                          （horseradish peroxidase，HRP）标记山羊抗鼠和抗兔
                小或无不良反应的优点，它们成为抗肾毒性药物开                            IgG 二抗（沈阳万类生物科技有限公司）；TNF⁃α、
                发的潜在候选者。水晶兰苷（monotropein，MON）是                    IL⁃1β和 IL⁃6 ELISA 试剂盒（江苏酶免实业有限公
                巴戟天的主要环烯醚萜苷类成分，具有抗炎、抗氧                            司）；胎牛血清（上海生工生物工程股份有限公司）；
                化和抗细胞凋亡等多种药理活性 。MON 已被证                           青霉素⁃链霉素溶液和 DMEM/F⁃12 培养基（武汉塞
                                              ［8］
                明可以减轻过氧化氢（H2O2）诱导的氧化应激和炎                          维尔生物科技有限公司）；ECL 化学发光检测试剂
                  ［9］
                症 。研究表明，MON 通过抑制 TLR4/NF⁃κB/NL⁃                   盒、TRIzol试剂、逆转录试剂盒和荧光定量PCR试剂
                RP3 通路可减轻肝损伤         ［10］ 。MON 通过激活 NRF2/         盒（南京诺唯赞生物科技公司）；CCK⁃8 试剂盒和甲
                                                       ［11］
                PINK 轴诱导自噬可缓解脓毒症相关结肠损伤 。然                         醛溶液（安徽白鲨生物科技有限公司）；LPS 和 ATP
                而，MON 对S⁃AKI的影响尚未被完全阐明。本研究                       （Sigma⁃Aldrich 公司，美国）；二氢乙啶（dihydroethid⁃
                采 用 盲 肠 结 扎 穿 孔（cecum ligation and puncture，      ium，DHE）、RIPA 裂解液、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑
                CLP）建立小鼠 S⁃AKI 模型和脂多糖（lipopolysac⁃                制剂、BCA 蛋白浓度测定试剂盒、DAPI 染色液和
                charide，LPS）/腺苷三磷酸（adenosine triphosphate，        Lipo6000 转染试剂（上海碧云天生物技术有限公
                                                                          TM
                ATP）刺激人肾小管上皮细胞（human kidney⁃2，HK                  司 ）；pCMV⁃Myc⁃Ikbkb（human）和 pCMV⁃NLRP3
                ⁃2）建立体外脓毒症模型，旨在探讨 MON 对 S⁃AKI                    （human）⁃3×FLAG⁃Neo 质粒（武汉淼灵生物科技有
                的影响及其机制。                                          限公司）；PCR 引物（安徽通用生物系统有限公
                                                                  司）。引物序列如下：TNF⁃α（上游 5′⁃GACGTG⁃
                1  材料和方法
                                                                  GAACTGGCAGAAGA⁃3′；下游5′⁃GGCTACAGGCTT⁃
                1.1  材料                                           GTCACTCG ⁃ 3′ ），IL ⁃ 1β（ 上 游 5′ ⁃ TGCCTTCTT⁃
                1.1.1 动物                                          GGGACTGATGC⁃3′；下游 5′⁃GCAAGTGCATCGTT⁃
                    6周龄，体重20~25 g SPF级雄性BALB/c小鼠购                 GTTC⁃3′），IL⁃6（下游 5′⁃AGGAGAACCAAGCAAC⁃
                自扬州大学动物实验中心。将小鼠置于温度（25±                           GACA⁃3′；下游5′⁃CTCTGCTTGTGAGGTGCTGA⁃3′）。
                2）℃、相对湿度（55±15）%的环境中饲养，自由饮水                       1.1.3 仪器
                饮食所有动物实验均按照 3R 原则进行。本研究涉                              VITROS 4600全自动生化分析仪（强生公司，美
                及的所有动物实验均已通过江苏海洋大学动物伦                             国）；Light Cycler480 实时荧光定量 PCR 仪（罗氏公
                理委员会的审查和批准（批准号：2022221091）。在                      司，美国）；蛋白电泳和转印仪（伯乐公司，美国）；化

                动物实验中严格遵照《NIPRD 标准操作程序（NI⁃                        学发光成像仪（杭州申花科技有限公司）；恒温培养
                PRD/ 05.03.05⁃1）》和实验动物护理原则（NIH 出版                 箱（WIGGENS公司，德国）；全波长酶标仪（BioTek公
                物第85⁃23号，1985年修正）。                                司，美国）。
                1.1.2 试剂                                          1.2  方法
                    MON（CAS# 5945⁃50⁃6，HPLC 纯度≥98%，上海             1.2.1 动物分组及处理
                Aladdin 生化科技股份有限公司），其化学结构式如                           实验开始前，所有小鼠均适应环境 1 周。小鼠

                图 1A 所示；地塞米松（dexamethasone，DEX）（Med               被随机分为 6 组（每组 15 只）：阴性对照（negative
                Chemexpress公司，美国）；HK⁃2细胞（武汉旗赛生物                   control，NC）组、假手术（Sham）组、CLP组、CLP+MON
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