Page 107 - 南京医科大学自然版

第45卷第2期 丁 峰，喻夏飞，朱妍慧，等. SMC1A在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞凋亡的影响［J］.
2025年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（2）：245-252 ·247 ·

表1 siRNA序列
Table 1 Sequences of siRNA

siRNA Forward（5′→3′） Reverse（5′→3′）
Control siRNA UUCUCCGAACGUGUCACGU ACGUGACACGUUCGGAGAA
SMC1A siRNA1 GGAGGUUCUUCUGAGUACA UGUACUCAGAAGAACCUCC
SMC1A siRNA2 GCCGGGACUGUAUUCAGUAUA UAUACUGAAUACAGUCCCGGC
SMC1A siRNA3 UAGGAGGUUCUUCUGAGUACA UGUACUCAGAAGAACCUCCUA

应条件：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。采用RT⁃qPCR检测 封 片 ，显 微 镜 下 观 察 染 色 情 况 。 其 中 ，一 抗 为
SMC1A 表达，反应条件：95 ℃预变性 30 s，95 ℃变性 SMC1A 抗体（工作浓度为 1∶250），对应二抗的工作
10 s，60 ℃退火 30 s，共 40 个循环。引物由上海捷瑞 浓度为 1∶500。分别由 2 位实验人员采用双盲阅片
生物有限公司设计合成，引物序列见表2，以GAPDH 的方式，对上述组织染色情况进行评分。于镜下随
为内参，采用 2 -ΔΔCt 法计算SMC1A的相对表达量。 机选取每例组织的5个视野，按如下规则进行评分：
1.2.4 免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC） ①阳性细胞占比≤5% 为0分，6%~25%为1分，26%~
染色 50%为2分，51%~75%为3分，>75%为4分。②染色
取患者手术切除的癌组织、癌旁组织标本进行 强度：淡黄色为 1分，浅棕色为2分，棕褐色为3分。
石蜡包埋、切片、烤片、脱蜡、水化及抗原修复处理 ③将阳性细胞占比得分与染色强度得分相乘，记为
后，按照广州锐博免疫组化试剂盒步骤处理标本后 IHC的总评分。总评分：0~3分为阴性，≥ 4分为阳性。
表2 引物序列
Table 2 Primer sequences

Gene Forward（5′→3′） Reverse（5′→3′）
GAPDH GGACCTGACCTGCCGTCTAG GTAGCCCAGGATGCCCTTGA
SMC1A AACCTGCGGGTAAAGACCCT GGCAAAGGTACGGTCCTCAG
Bcl⁃2 GGTGGGGTCATGTGTGTGG CGGTTCAGGTACTCAGTCATCC
Bax CCCGAGAGGTCTTTTTCCGAG CCAGCCCATGATGGTTCTGAT
Caspase⁃3 GAAATTGTGGAATTGATGCGTGA CTACAACGATCCCCTCTGAAAAA
Caspase⁃9 CTCAGACCAGAGATTCGCAAAC GCATTTCCCCTCAAACTCTCAA

1.2.5 Western blot检测蛋白表达 分析以乳腺癌患者预后为因变量，将年龄、临床分
取转染对照siRNA、SMC1A siRNA 72 h的MCF⁃7 期、淋巴结转移、SMC1A 表达量共 5 个自变量纳入
细胞，用 RAPI 裂解液提取总蛋白，BCA试剂盒检测 Cox 模型进行影响因素分析，通过各因素的风险比
蛋白浓度，进行10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝 （hazard ratio，HR）及其 95%置信区间（confidence in⁃
胶电泳分离蛋白，将蛋白转至聚偏二氟乙烯膜上。 terval，CI）来分析自变量与因变量之间的关系。模
5%脱脂奶粉溶液封闭 1 h，加 SMC1A 一抗（1∶250） 型的参数估计的可靠性通过比较各自变量的参数
4 ℃ 孵育过夜，第2天除去一抗，用洗膜缓冲液洗涤 标准差和对应 HR 值的 95%CI 来判断，参数标准差
3 次后加入羊抗兔二抗（1∶10 000），室温孵育 1 h。 和 95%CI范围越小，模型的估计结果越可靠。
以GAPDH 作为内参，电化学发光仪进行蛋白成像，
2 结 果
Image J软件分析灰度值。
1.3 统计学方法 2.1 SMC1A基因在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的
应用 SPSS 20.0 统计软件处理数据和 Cox 回归 表达及其与乳腺癌预后的相关性
模型分析，计量资料以均数±标准差（x ± s）表示，两 通过TCGA数据库，分析1 093例浸润性乳腺癌
组数据间的比较采用独立样本t检验。计数资料用 和 112 例正常乳腺组织中 SMC1A mRNA 的相对表
例数（百分率）表示，SMC1A蛋白的阳性表达率与临 达量。结果表明，SMC1A在乳腺癌组织中表达较正
床病理特征之间的相关性通过Fisher精确概率法来 常乳腺组织显著上调（图1A）。
评估，P < 0.05为差异有统计学意义。Cox回归模型 以乳腺癌患者预后为因变量（0=预后良好，1=