Page 11 - 南京医科大学自然版

第45卷第2期 潘先均，刘 美，李光新，等. SELEX技术筛选乳腺癌亚型组织细胞的DNA适配子［J］.
2025年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（2）：147-156 ·151 ·

ssDNA

MCF⁃7
ssDNA
Alkaline denaturation
Affinity purification
dsDNA
MDA⁃MB⁃231
PCR amplification
ssDNA

MCF⁃10A

ssDNA（aptamers）
Cloning and sequencing；Sequence analysis；Functional ldentification
图2 交叉串联细胞⁃SELEX筛选的流程图
Figure 2 Flow chart for tandem crossed cell⁃SELEX screening

表1 交叉串联细胞⁃SELEX筛选的情况 提示本研究获取的 DNA 适配子对乳腺癌细胞具有
Table 1 Details of screening by tandem crossed cell ⁃ 较好的特异性。在与乳腺癌细胞特异性结合过程
SELEX
中，按亲和力大小排序为 ABC⁃18、ABC⁃56、ABC⁃2、
Cell Line Screening round Screening state
ABC⁃17、ABC⁃82，其中 ABC⁃18、ABC⁃56 与乳腺癌
MCF⁃7 1，2，5，6，9，10，13，14，17，18 Positive
2 个亚型细胞具有最大的亲和力（图5），可以优选后
MDA⁃MB⁃231 3，4，7，8，11，12，15，16，19，20 Positive
续研究。
MCF⁃10A 21，22 Negative
2.7 DNA适配子与乳腺癌细胞株的结合
2.5 适配子的克隆、测序与序列分析 激光共聚焦显微分析提示，适配子 ABC⁃18 和
完成 20 轮人乳腺癌细胞 MCF⁃7 和 MDA⁃MB⁃ ABC⁃56 均可与乳腺癌细胞 MCF⁃7 和 MDA⁃MB⁃231
231的交叉串联的正筛选，继以2轮正常人乳腺上皮 结合；初步证实这两个适配子可能具有同时结合2个
细胞 MCF⁃10A 的负筛选；之后，回收适配子行 PCR 乳腺癌细胞亚型的功能（图6）。
扩增，经 TA 克隆，随机挑选 100 个克隆进行测序和 2.8 DNA适配子与临床乳腺癌组织切片的结合
序列分析。其中有72个适配子序列符合设计要求， 免疫荧光染色显示（图7），DNA适配子ABC⁃56
全长88 bp，上下游引物正确，中间52 bp为随机序列 可以结合 3 种乳腺癌亚型组织（Luminal A、Luminal
（表2）；Blastn精确比对提示，所提交的72个DNA适 B、HER2），不与三阴性乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤
配子均未发现相同序列。72 个适配子中编号为 及正常乳腺组织结合。ABC⁃18可与2个乳腺癌亚型
ABC⁃2者重复22次，ABC⁃17、18、56、82重复2次，其 组织（Luminal B、HER2）结合，不与其他乳腺癌亚型、
他适配子均无重复；采用出现重复序列的 5 个适配 乳腺良性肿瘤或正常乳腺组织结合。因此，ABC⁃56
子进行后续研究。 适配子可能具有较好的功能。

2.6 DNA适配子的细胞特异性分析
3 讨 论
流式细胞分析显示，FITC标记的5个DNA适配
子与乳腺癌细胞 MCF⁃7 和 MDA⁃MB⁃231 结合，不与 近年来 SELEX 技术取得较大发展，以活细胞
乳腺癌细胞 SKBR3 结合，也不与正常人乳腺细胞 为靶标的细胞⁃SELEX 技术在肿瘤领域的研究逐年
MCF⁃10A 以及非乳腺来源的各种腺癌细胞 SGC⁃ 增多 ［6，15］ 。本课题组建立了细胞⁃SELEX 技术平
7901、A549、SW480、A2780、HepG2和PANC⁃1结合； 台 ［16⁃17］ ，以胃癌细胞进行SELEX筛选，继以正常胃黏