Page 12 - 南京医科大学自然版

第45卷第2期
·152 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年2月

A B
（
62 （bp）bp） M 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
60
（℃） 58 500
56
PCR Tm 54 400 —88 bp
52
200
100
50
48
46
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 1 2 M 0 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Negative Negative
500
SELEX rounds
400
200
C 12 000 MDA⁃MB⁃231 100 —88 bp
Fluorescence intensity 8 000
10 000
MCF⁃7
6 000
4 000
2 000
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112131415161718192021
Round
A：Temperature gradient PCR test for optimizing of cell⁃SELEX conditions. B：PCR product of ssDNA corresponding to 0-20 round positive cell⁃
SELEX screening. C：The affinity of aptamers during tandem crossed cell⁃SELEX screening.
图3 乳腺癌细胞DNA适配子的交叉串联细胞⁃SELEX筛选
Figure 3 Cross⁃tandem screening of DNA aptmers to breast cancer by cells⁃SELEX

膜细胞负筛选，成功获取了胃癌细胞特异性DNA适 能结合该亚型乳腺癌细胞，但不能识别和结合其他
配子，证实了一个含 52 个随机碱基序列的 DNA 文 亚型的乳腺癌细胞。本研究采用交叉串联的细胞⁃
库在细胞⁃SELEX筛选中的可靠性 ［17-20］ 。 SELEX 法，获取了 72 个完全符合设计要求的 DNA
乳腺癌分为多个分子亚型，如果个体化诊断治 适配子，通过序列分析初步筛选了5个候选适配子；
疗措施能同时兼顾多种亚型，就可能提高效率、使 通过流式细胞术、共聚焦显微分析和免疫荧光染色
更多人群获益。为此，国内外学者在乳腺癌细胞⁃ 分析等优选实验，最终获取了 2 个 DNA 适配子，能
SELEX筛选方面完成了较多研究：王芹芹等 ［21］ 对三 同时结合 MCF⁃7 和 MDA⁃MB⁃231 乳腺癌细胞，但不
阴性乳腺癌细胞 SELEX 筛选 PCR 扩增条件进行了 与正常乳腺细胞及其他腺癌细胞结合；采用该方法
优化；Moosavian 等 ［22］ 采用细胞⁃SELEX 法筛选了高 可获取同时结合 2 种亚型乳腺癌细胞的 DNA 适配
表达 HER2 的乳腺癌细胞 RNA 适配子；Liu 等 ［9，23］ 通 子，通过优选实验的适配子可以结合临床乳腺癌组
过 21 轮细胞⁃SELEX 筛选，获取了乳腺癌细胞株 织切片。
SK⁃BR⁃3 的特异性核酸适配子，可区分 SK⁃BR⁃3 细 与常规细胞⁃SELEX技术比较 ［27⁃28］ ，本研究设计
胞和其他乳腺癌细胞，也可将 SK⁃BR⁃3 与正常乳腺 的交叉串联细胞⁃SELEX 筛选法，具有以下特点。
细胞区分开、具有潜在亚型识别功能；Li 等 ［24］ 以高 ①靶细胞选择：临床乳腺癌分子亚型与乳腺癌细胞
转移乳腺癌细胞 MDA⁃MB⁃231 正筛选、低转移乳腺 株与之间存在大致的对应关系 ［10⁃11，29⁃30］ ，可以此选择
癌细胞MCF⁃7为负筛选，通过消减细胞⁃SELEX法获 相应的靶细胞进行研究；本研究在靶细胞遴选中重
取的适配子有望用于循环肿瘤细胞捕获和肿瘤转 点关注乳腺癌细胞株与乳腺癌常规分子分型密切
移预测；Civit 等 ［25］ 则在细胞⁃SELEX 技术中引入高 相关的标志性分子表达情况；最终选择人乳腺癌细
通量测序、放射活性和qPCR分析，获取了具有广谱 胞 MCF⁃7 和 MDA⁃MB⁃231 作为正筛选细胞，以正常

识别特征的乳腺癌细胞适配子。此外，采用细胞⁃ 乳腺上皮细胞MCF⁃10A作为负筛选细胞，希望所获
SELEX 技术获取的核酸适配子既可用于肿瘤细胞 取的 DNA 适配子能够识别更多亚型的乳腺癌细
的识别与检测，还可能获得全新的乳腺癌细胞特异 胞。②靶细胞交叉串联的设计：笔者最初采用 2 种
性分子标志 ［26］ 。然而，这些研究多采用 1 种癌细胞 乳腺癌细胞株直接串联筛选（即 MCF⁃7 细胞序贯
作为靶标完成SELEX正筛选，获取的核酸适配子虽 MDA⁃MB⁃231 细胞筛选）、继以正常细胞负筛选，发