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第45卷第2期 潘先均，刘 美，李光新，等. SELEX技术筛选乳腺癌亚型组织细胞的DNA适配子［J］.
2025年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（2）：147-156 ·153 ·

DAPI FITC Merge 表2 随机抽取100个克隆的适配子测序情况
Table 2 Aptamer sequencing from randomly selected 100
clones
Blank Upstream/ Bases in Subsequences

downstream primers random region of aptamer（n）
incorrect - 009
MCF⁃10A 0 Round correct =52 072
002
>52
correct
<52
correct
017
Total - 100
22 现适配子的得率很低、难以进行后续筛选（数据未
Round 发表）；本研究尝试先以 MCF⁃7 细胞进行 2 轮正筛

选、再串联以MDA⁃MB⁃231细胞进行2轮正筛选；之
后重复再进行上述筛选，即交叉⁃串联的筛选；最后
Blank 完成 2 轮负筛选。从理论上讲，这种筛选方法虽然
可以获得同时识别 2 种亚型乳腺癌细胞的 DNA 适
配子，但也可能降低适配子的特异性。③PCR 条件
不稳定、需反复优化确定：交叉串联细胞⁃SELEX 筛
0
MCF⁃7 Round 选过程中，原始DNA文库扩增以及每一轮筛选所需
的退火温度并不完全一致，本研究通过温度梯度
［31］
PCR实验以确定每次筛选的退火温度（ΔT=0.5 ℃） ，
发现在前 10 轮筛选过程中 PCR 退火温度波动幅度
22 较大，10轮以后相对稳定，推测可能是与2种靶细胞
Round 结合的适配子的结构差异较大，导致退火温度波动

比较明显；随着筛选的进行，2种细胞的适配子相似
度越来越大，它们之间的退火温度差异可能逐渐
Blank 缩小、最终趋于稳定；同时，每轮筛选 PCR 的循环
次数不需调整即可满足实验要求；此外，每次回收
的ssDNA稀释10倍后用作PCR模板，比不稀释的扩
增效果更好，可能跟稀释后减少了回收过程产生的
MDA⁃MB⁃231 0 Round 杂质对 PCR 体系的影响有关。④筛选次数与亲和

力监测的矛盾：筛选过程中 MCF⁃7 和 MDA⁃MB⁃231
细胞对应的亲和力曲线呈现交叉趋势，提示继续进
行 SELEX 筛选可能导致适配子对 MDA⁃MB⁃231 细
22 胞的亲和力进一步升高，但对MCF⁃7细胞的亲和力
Round 可能降低。因此，这种方法筛选 DNA 适配子，需要

兼顾 2 种靶细胞的特性，虽然可以同时识别 2 种肿

After round 22 selecting，FITC labelled ssDNA binding to MDA⁃ 瘤细胞，但它们的亲和力也可能因此受到影响。
MB⁃231 and MCF⁃7 cells while not binding to MCF10A cells. Simulta⁃ 尽管如此，采用本研究方法获取的DNA适配子
neously，the round 0 ssDNA hardly binded to MDA⁃MB⁃231，MCF⁃7 or
还存在一些不足，比如获取的适配子不能结合体外
MCF10A cells. 培养的乳腺癌SKBR3细胞，这可能在应用研究中产
图4 激光共聚焦显微镜观察22级ssDNA库（适配子）与细
生漏诊、治疗无响应等不利影响；适配子与乳腺癌
胞的结合（×200）
Figure 4 Round 22 ssDNA（aptamers）binding to target 细胞结合的亚细胞定位还不明确，适配子作用的靶
cells by confocal laser microscope（×200） 标还不清楚；适配子对三阴性乳腺癌的结合情况还