Page 54 - 南京医科大学自然版

第45卷第4期
·490 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年4月

表1 RT⁃qPCR引物序列
Table 1 RT⁃qPCR primer sequences
Gene Forward primer（5′→3′） Reverse primer（5′→3′）
Serping1 GAACTTGGACCAGGACGCAG GCTGGTAGCTTCGGGATCTG
H2⁃D1 TCCGAGATTGTAAAGCGTGAAGA ACAGGGCAGTGCAGGGATAG
Gbp2 CTGGATCTGCACAGGCCAAT AGCAACGAGCTGATGAGACA
Fkbp5 TGCTACCTGAAGCTCCGAGA GGCCCTGTTCTGAGGATTGA
Psmb8 CAGTCCTGAAGAGGCCTACG CACTTTCACCCAACCGTCTT
Srgn AATCCAGAGGCTGAGTGGAG TGGCTCTCCGAGCAGGATAA
H2⁃T23 TCAGGTTCCTCACAGACCCA GTCCACGTAGCCGACAATGA
Ggta1 GTGAACAGCATGAGGGGTTT GTTTTGTTGCCTCTGGGTGT
Cd14 ACTGAAGCCTTTCTCGGAGC TGAAAGCGCTGGACCAATCT
Ptx3 CGCTGTGCTGGAGGAACTG ACAGGATGCACGCTTCCAA
S100a10 AGTGCTCATGGAACGGGAGT CTCTGGAAGCCCACTTTGCC
Ptgs2 CAGGACTCTGCTCACGAAGG ATCCAGTCCGGGTACAGTCA
Emp1 AAGAGAGGACCAGACCAGCA GACCACAAAGAGACCAGCCA
Tm4sf1 TCACTGGGTTTGGCAGAAGG TGGGCTCATAGCACTTGGAC
B3gnt5 CGTGGGGCAATGAGAACTAT CCCAGCTGAACTGAAGAAGG
CIcf1 CTTCAATCCTCCTCGACTGG TACGTCGGAGTTCAGCTGTG
Adgrf5 GGAAGAACAGGACATCCGCTCA CCAGGAGTTCAAGGCAGACTTG
Cdh5 GAACGAGGACAGCAACTTCACC GTTAGCGTGCTGGTTCCAGTCA
Robo4 GTCATTGCCAGTAGTGCTGTCC AATGGCGTCCTCGCTGGTGTAT
Nktr AGCGGAGAGAAGTGGAGCAAAG TGGTGACCATCAGAGTGTCTCG
Snrnp70 GCCTTCAAGACTCTGTTCGTGG CTCGATGAAGGCATAACCACGG
Prpf39 CTCCTGGTGATGACCTTCCATC GTCCACCTCTTACTAACTTCATGC
Npsr1 TGTCCTGCTGTATGCCTCTACC CTCCACGCTATTCCGATGAGGA
Prc1 CTGTTCCAAGGCGTCCAGAAGT CCTCGGTTTGTAAATCGACCTGG
β⁃actin CATTGCTGACAGGATGCAGAAGG TGCTGGAAGGTGGACAGTGAGG

活化状态。结果显示，与对照组WT小鼠相比，小鼠 2.2 HD病程早期星形胶质细胞转录组学变化
在HD病程早期（3月龄），星形胶质细胞体积和分支 为进一步探明HD病程中激活的星形胶质细胞
长度未表现出明显差异（P均> 0.05，图1A~C）；而在 在转录水平上的差异，通过单细胞解离及磁珠分选技
病程后期 HD 组（12 月龄）的星形胶质细胞体积增 术富集HD病程早期和后期YAC128小鼠脑组织中的
大，分支长度增加（P 均< 0.001，图 1D、E）。在脑损 星形胶质细胞，进行转录组学测序分析（图2A）。
伤或神经退行性疾病发生时，星形胶质细胞由静止 3 月龄 HD 小鼠和 WT 小鼠主成分分析结果显
状态转变为活化状态，成为反应性星形胶质细胞， 示，两组之间投影区域有部分重叠，其中第一主成
主要由神经毒性（A1）和神经保护性（A2）两种类型 分解释率为81.9%，第二主成分解释率为8.9%，表明
组成。在此前的报道中，A1型星形胶质细胞无法促 两者间存在一定差异（图 2B）。此外，在 3 月龄 HD
进神经元存活和生长、突触形成和吞噬作用，并诱 小鼠脑内星形胶质细胞中共筛选出197个表达量显
导神经元和少突胶质细胞死亡，在多种神经退行性 著上调基因和 122 个显著下调基因（图 2C）。基于
疾病中大量存在 ［12，17］ 。利用RT⁃qPCR检测A1和A2 这些DEG的功能富集分析显示，上调基因主要富集
型星形胶质细胞标志物的表达水平，结果显示，相比 于金属离子结合、DNA结合、蛋白质水解、神经元分
WT小鼠，HD病程早期A1和A2型星形胶质细胞标志 化等相关功能，而下调基因主要富集于胞外成分以
物的表达变化并不明显；病程后期，A1型星形胶质细 及突触相关的突触后膜、突触间隙和维持突触结构
胞标志物的表达显著增加（图1F）。这些结果说明， 等相关功能（图 2D、E），以 Six4、Lmx1a、Ascl2 为代
星形胶质细胞的活化程度随着HD的病理进展加剧， 表的突触相关基因在 HD 样本与对照组样本中存
病程后期星形胶质细胞主要活化为A1型。 在明显差异（图 2F）。这些结果说明，在小鼠 HD