Page 60 - 南京医科大学自然版

第45卷第5期
·646 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年5月

1.2.2 免疫组化与判读 析。采用卡方检验分析CYB5R2表达与临床病理特
免疫组化：标本均经过 10%中性甲醛固定，常 征的关系。采用 Kaplan⁃Meier 生存分析（组间比较
规脱水，石蜡包埋，3 μm切片，行HE和免疫组化En⁃ 采用 Log⁃rank 检验）比较研究组间的生存差异。
Vision 两步法染色（CYB5R2 兔抗人单克隆抗体，产 P < 0.05为差异有统计学意义。
品编号PH8178，稀释比1∶400，Abmart 公司，美国），
2 结 果
光镜下观察。具体步骤严格按照全自动免疫组化
仪标准流程和试剂盒说明书进行。 2.1 CYB5R2在DLBCL中高表达
CYB5R2判读标准：CYB5R2阳性定位于细胞核 通过TCGA数据库获取DLBCL的差异表达基因
和细胞质，阳性结果通过对肿瘤细胞染色强度及肿 数据集，应用DAVID 6.8平台进行GO功能富集分析
瘤细胞阳性数量进行半定量分析。①依据染色强 筛选关键基因CYB5R2（图 1A）。将TCGA数据库中
度进行计分：阴性（10倍物镜下不可见）为0分，弱阳 47 例 DLBCL 肿瘤组织与在 GTEX 数据库中获得的
性（10 倍物镜下为浅棕色）为 1 分，强阳性（10 倍物 337 例 正 常 外 周 血 淋 巴 细 胞 作 对 比 ，结 果 显 示
镜下为棕褐色）为 2 分。②依据阳性细胞百分比进 CYB5R2基因在DLBCL中的表达明显高于正常血液
行评分：阳性细胞数<50%为 1 分，≥50%为 2 分。将 淋巴细胞（P < 0.05，图1B）。进一步判读CYB5R2在
两项得分相乘判断CYB5R2的表达：0、1、2分定义为 DLBCL和小B细胞淋巴瘤MCL、SLL/CLL、MALT、FL
零或低表达，4分定义为高表达。 中的表达（图2），结果显示CYB5R2在DLBCL中高表
1.2.3 随访 达，差异均有统计学意义（P均< 0.001，表1）。
通过查阅患者的电子病历系统确认患者住院 2.2 临床与病理特征
治疗情况，对所有患者进行电话随访，随访时间截 59例DLBCL患者年龄为（56.2±15.2）岁，男37例，
至 2024 年3月。总生存期（overall survival，OS）定义 女22例，男女比1.6∶1。59例患者中，原发灶位于淋
为患者从确诊 DLBCL 到任何原因死亡或最后 1 次 巴结内37例，位于淋巴结外22例，参照Ann Arbor分
随访的时间间隔。 期 ：Ⅰ 期 8 例（8/59，13.6% ），Ⅱ 期 11 例（11/59，
1.3 统计学方法 18.6%），Ⅲ期14例（14/59，23.7%），Ⅳ期26例（26/59，
所有数据应用 SPSS 23.0 软件进行统计学分 44.1% ）。 59 例 患 者 中 CD10 阳 性 22 例（22/59，
A B
Not Sig log2FC P value P value and log2FC *
8
250
6
CYB5R2 4
200

MRPL17 COLOA1
150 2
P⁃value ACSL1 C1OBP PARP1 DBI
DTYMK
⁃lg MRPL14 PFDN4
100 0
NUDT1 DLBCL Normal lymphocyte
（n=47）（n=337）
ACOT7 CYB5R2
50
MRPS28 TYM6

0
-20 -10 0 10
log2 （fold change）
Total=25 100 variables
A：Volcano plot of differentially expressed genes in DLBCL tissues from the TCGA database，with genes enriched in the GO analysis and located in
the mitochondria labeled. B：Compared with lymphocytes in normal blood from the GTEX database，CYB5R2 is highly expressed in DLBCL tissues in
*
the TCGA database. P < 0.05.
图1 CYB5R2在DLBCL中高表达（与正常淋巴组织相比）
Figure 1 CYB5R2 is highly expressed in DLBCL tissues（compared to normal lymphoid tissue）