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第45卷第6期 戈艳蕾，孙思怡，任泓沁，等. scRNA⁃seq和Bulk RNA⁃seq联合分析揭示MTRNR2L1介导COPD进展中
2025年6月 PANoptosis下调［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（6）：786-797 ·789 ·

检测试剂盒，将BASE⁃2B和BASE⁃2B OE⁃MTRNR2L1 细胞消 学发光系统对蛋白条带进行显影。
化后重悬，计数并接种到 24 孔细胞培养板中。在 1.3 统计学方法
细胞培养箱中培养 12 h 后，用 LPS（1 μg/mL）处理 基因表达综合数据库数据集处理和分析均通
细胞；然后用 1×PBS 冲洗细胞，经胰蛋白酶消化， 过 R 软件（4.3.0 版）完成。采用 GraphPad Prism 8 和
以 1 000 g离心5 min。将离心得到的细胞沉淀重悬 SPSS 25.0 进行统计分析与作图。计数资料用率表
于 Annexin V⁃FITC 结合液中。对于每个样本，将 示，采用χ 检验；定量数据以均数±标准差（x ± s）表
2
195 μL 结合液与 5 μL Annexin V⁃FITC 和 10 μL PI 示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采
混合均匀后在室温下孵育 20 min，随后对样本进行 用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD. t检验，
流式细胞仪检测。 P < 0.05表示差异有统计学意义。

1.2.8 Western blot
2 结 果
将适量肺组织切碎，在含蛋白酶抑制剂的裂解
缓冲液中匀浆，并在冰上超声处理。经过 12 000 r/ 2.1 COPD患者肺部基因表达改变
TM 对 GSE124180 数据集中 6 例 COPD 患者肺组织
min 离心 10 min，离心后收集上清液。使用 Pierce
BCA 蛋白检测试剂盒测定蛋白质的浓度。样品与 样本和 15 例非 COPD 患者肺组织样本转录组数据
上样缓冲液混合，煮沸并冷却。随后将蛋白质装载 利用 PCA 质控，结果未发现明显异常的样本（图
到 Mini⁃PROTEAN TGX 预制蛋白质凝胶上，先在 1）。通过差异表达分析鉴定出DEG，上调基因包括
®
TM
80 V下电泳 30 min，再在 120 V 下电泳 90 min。然 角蛋白 13（keratin 13，KRT13）、信号传导及转录激
后将蛋白质转移到 PVDF 膜上，转膜时间为 2 h（电 活 蛋 白（signal transducer and activator of transcrip⁃
流为 250 mA）。膜于5%脱脂奶、室温下封闭2 h，然 tion，STATH）、角蛋白 6A（keratin 6A，KRT6A）、羧肽
后用 1×Tris 盐缓冲液（含 Tween⁃20，即 TBST）洗涤 酶 A4（carboxypeptidase A4，CPA4）、表面活性蛋白
3 次。一抗包括：抗 Z⁃DNA 结合蛋白 1（Z⁃DNA A2（surfactant protein A2，SFTPA2）等；下调基因包括
binding protein 1，ZBP1）、抗 裂 解 半 胱 天 冬 酶 3 LDHC、IGHG1、PCAT14、ITLN1 和 ANKRD20A9P 等
（cleaved caspase⁃3）、抗 GSDMD（gasdermin D）、抗混 （图2A、B）。对DEG进行GO功能富集分析与KEGG
合 系 列 蛋 白 激 酶 样 结 构 域（mixed⁃lineage kinase 通路富集分析，发现DEG在细胞组成方面参与组成
domain⁃like，MLKL）和抗β⁃肌动蛋白（β⁃Actin），4 ℃ T 细胞受体复合物、在生物过程主要参与免疫应答
下与膜孵育过夜。经过3次TBST冲洗后，用二抗在 和白细胞迁移等免疫应答相关过程（图2C、D）；在细
室温下孵育 2 h。再经过 3 次 TBST 冲洗后，使用化 胞因子及其受体相互作用、T 细胞受体信号传导途

100
GSM3523513 GSM3523471
GSM3523477
50 GSM3523510
GSM3523504
GSM3523483 GSM3523474
（7.7%） 0 GSM3523492 GSM3523495 Group
GSM3523465
GSM3523522
Control
GSM3523501
Dim2 GSM3523516 GSM3523498 GSM3523486 COPD
GSM3523489 GSM3523468
-50 GSM3523519
GSM3523462
GSM3523507
-100 GSM3523480

-200 0 200
Dim1（30.3%）
图1 对照组及COPD组样本的PCA分析置信椭圆图
Figure 1 PCA analysis with confidence ellipses for the control and COPD groups