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第45卷第8期
               ·1112 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2025年8月


              如从上皮型转化到间质型，从而增强了肿瘤的侵                             附属第一医院收治的 50 例行 CRC 手术的患者。纳
              袭能力    ［11］ 。此外，EZH2 还能调节 Wnt/β⁃catenin、          入标准：①确诊为CRC，且术前未行放化疗、免疫治
              MAPK和PI3K/AKT等信号通路，进一步影响肿瘤细                       疗；②手术中可获取癌组织（癌灶中心处）和癌旁正
              胞的生物学活性       ［12-13］ 。在其他癌症中，EZH2的异常             常组织（距离癌组织>10 cm且经病理证实为正常组
              表达和功能失调同样与肿瘤的进展密切相关。例如                            织）；③年龄 35~80 周岁；④具有基本理解和表达能
              在乳腺癌中，EZH2 通过抑制雌激素受体α（estrogen                    力；⑤自愿加入研究，且具有完整的病例资料及随
              receptor，ERα）信号通路，增强细胞的增殖和侵袭能                     访信息。排除标准：①合并其他癌症或患有严重
              力 ［14］ ；在前列腺癌中，EZH2 通过调节雄激素受体                     心、脑、肺部疾病；②认知障碍或精神疾病的患者；
             （androgen receptor，AR）信号通路和促进上皮⁃间质                 ③已入组类似研究者。本研究获得河北北方学院
              转化（epithelial⁃mesenchymal transition，EMT），增强      附属第一医院伦理委员会的批准与监督（批准号：
              肿瘤细胞的侵袭和转移能力             ［15］ ；在肺癌中，EZH2通         2024063）。
              过沉默抑癌基因和调节EMT相关基因，促进肿瘤的                           1.1.2  实验动物
              侵袭和化疗耐药性         ［16］ 。这些机制表明EZH2在多种                   SPF 级 6~8 周龄健康 BALB/c⁃nu 裸鼠 24 只，体
              癌症类型中具有广泛作用，是潜在的治疗靶点。                             重 16~20 g，雌性，购自河南斯克贝斯生物科技有限
                  研究证实EZH2增加了整合素β1编码ITGB1的                      公司。实验期间自由进食和饮水，动物房恒温

              转录，从而激活下游效应物局部黏着斑激酶（focal                         24 ℃，相对湿度 60%。BALB/c⁃nu 裸鼠饲养于河北
              adhesion kinase，FAK）。活化的FAK磷酸化转化生长                北方学院附属第一医院动物实验室。在本研究中
              因子β受体Ⅰ（transforming growth factor⁃β⁃receptorⅠ，    实验步骤严格遵守 3R 原则。本研究已通过河北北
              TGF⁃βRⅠ），增强 TGF⁃βRⅠ与 TGF⁃βRⅡ的结合，                  方 学 院 实 验 动 物 福 利 伦 理 审 查（ 伦 理 批 号 ：
              激活转化生长因子⁃β（transforming growth factor⁃β，          K2021019）。
              TGF⁃β）信号通路     ［17］ 。FAK 是整合素介导的细胞和               1.1.3  细胞与试剂
              细胞外基质（extracelluar matrixc，ECM）之间信号转                   人 CRC 细胞系 SW480 细胞和 SW620 细胞购自
              导的重要介质，作为多种致癌酪氨酸激酶结合位点                            中国科学院（上海）细胞库。封闭山羊血清（北京
              的支架蛋白，通过磷酸化调节桩蛋白（paxillin，PXN）                    Solarbio 公司）；DAB 显色剂、辣根过氧化物酶标
              功能，诱导多种细胞过程，包括黏附、迁移、侵袭                            记的山羊抗兔 IgG 聚合物（北京中杉金桥生物技
              和转移   ［18-19］ ，促进丝状肌动蛋白（filamentous actin，        术有限公司）；EZH2抗体（武汉三鹰生物技术有限公
              F⁃actin）重新聚合，进而诱导氧化应激反应。活性氧                       司）；胎牛血清（fetal bovine serum，FBS，Gemini 公司，
             （reactive oxygen species，ROS）主要由线粒体产生，             美国）；DMEM培养基、青霉素⁃链霉素（10 000 U/mL）、
              已被证明可以介导调节细胞生长、分化、增殖和凋                            无血清培养基、Opti⁃MEM 减血清培养基（赛默飞
              亡所需的信号级联反应的激活 。                                   世尔科技公司，美国）；RIPA 裂解液、CCK⁃8 试剂
                                         ［20］
                  本团队在前期研究中已经证实 EZH2 在直肠                        盒（上 海 碧 云 天 生 物 科 技 有 限 公 司）；PVDF 膜
              癌组织中呈异常高表达，与 Runt 相关转录因子 3                       （Millipore 公司，美国）；BCA 蛋白质定量试剂盒（北
             （runt⁃related transcription factor 3，RUNX3）表达呈负    京天根生化科技有限公司）；细胞松弛素 D（F⁃actin
              相关，且二者在局部进展期直肠癌的一线化疗方案                            抑制剂）、抗荧光淬灭封片剂（MedChemExpress 公
              XELOX 新辅助化疗疗效评估中可作为重要的监测                          司，美国）；EZH2 抗体、DAPI、Triton X⁃100（Sigma⁃
              指标  ［21］ ，但EZH2的具体作用机制尚不明确。据此，                    Aldrich 公司，美国）；p⁃FAK 抗体、p⁃Paxillin 抗体、

              本研究通过分析 EZH2 通过调控 FAK/F⁃actin/ROS                 NOX2 抗 体 、NOX4 抗 体 、RUNX3 抗 体 、p⁃JNK 抗
              通路活性进而对结直肠癌细胞的增殖、侵袭和转移                            体、GAPDH 抗体（Abcam 公司，美国）；罗丹明⁃鬼
              的影响，从而为结直肠癌的靶向治疗提供科学依据。                           笔环肽染色液（北京索莱宝科技有限公司）；激光
                                                                共聚焦显微镜（Leica 公司，德国）；Transwell 小室
              1 材料和方法
                                                               （Corning 公司，美国）；EZH2 过表达载体和空载体

              1.1  材料                                          （GenePharma 公司，希腊）；编码 EZH2 的慢病毒表
              1.1.1  样本收集                                       达载体（pLVX⁃Puro）和空载体对照（Invitrogen 公
                  选取 2017 年 1 月—2018 年 12 月河北北方学院               司，美国）。
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