Page 58 - 南京医科大学自然版

第45卷第8期
·1114 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年8月

24、48 h分别向每孔加入10 μL CCK⁃8溶液，避光孵 示，组间比较采用卡方检验（当理论频数<5时，使用
育4 h。使用全自动酶标仪测量450 nm处的光密度 Fisher确切概率法），P < 0.05为差异有统计学意义。
（OD）值。
2 结 果
1.2.10 ChIP⁃qPCR实验
ChIP⁃qPCR程序根据试剂制造商提供的说明进 2.1 EZH2在人CRC组织中的表达及与临床病理特
行。用1%甲醛固定SW480细胞以交联染色质。然 征之间的关系
后通过超声处理将染色质碎裂。使用 IgG、EZH2 免疫组化结果显示，EZH2 在 CRC 癌组织中的
的 ChIP 级抗体富集蛋白质染色质片段。洗涤以去 阳性表达率为 72.00%（36/50 例），明显高于癌旁正
除非特异性结合和污染物后，洗脱并纯化染色质片 常组织38.00%（21/50例）（图1），采用R×C列联表卡
段。然后使用基于 GEO 数据库的 ChIP⁃seq 数据设 方检验分析显示：EZH2 在癌组织与癌旁组织中的
计的引物，对纯化的 DNA 片段进行靶向特定基因 表达分布存在显著差异（χ =9.180，P < 0.05）。进一
2
组区域的 qPCR。这种方法允许定量纯化的 DNA 步通过R×C列联表分析发现，EZH2的表达状态（阳
片段中靶基因区域的富集。引物序列如下：FAK 性/阴性）与肿瘤的淋巴结转移、远处转移均存在统
（forward）：5′ ⁃ CCATGCCCTCGAAAAGCTATG ⁃ 3′ ， 计学关联（P < 0.05）。此外，高表达EZH2的CRC患

FAK（reverse）：5′ ⁃ TGACGCATTGTTAAGGCTTCT ⁃ 者 5 年生存率（41.38%）明显低于低表达 EZH2 的患
3′；NOX2（forward）：5′⁃TCCGCATCGTTGGGGACTG⁃ 者（58.62%）（P < 0.05，表1）。
GA⁃3′，NOX2（reverse）：5′⁃CCAAAGGGCCCATCAA⁃
Adjacent normal tissues Tumor tissues
CCGCT⁃3′；NOX4（forward）：5′⁃TATCCAGTCCTTCC⁃
GTTGG⁃3′，NOX4（reverse）：5′⁃CCAATTATCTTCTG⁃
TATCCCATCTG⁃3′。 200
×
1.3 统计学方法
数据分析采用SPSS 19.0软件，服从正态分布或
A B
近似正态分布的数据以均数±标准差（x ± s）表示，两
图1 CRC患者癌旁组织（A）和癌组织（B）中EZH2的表达
组间差异采用 t 检验进行分析，多组之间比较采用 Figure 1 Expression of EZH2 in adjacent normal tissues（A）
单因素方差分析，计数资料以频数（百分比）形式表 and tumor tissues（B）of CRC patients

表1 EZH2表达水平与CSC患者临床病理特征之间的关系
Table 1 Correlation between EZH 2 expression levels and clinicopathological features of CSC patients
EZH2
Pathological parameter Case（n） χ 2 P
High expression［n（%）］ Low expression［n（%）］
Degree of differentiation 1.298 0.507
High 14 06（42.86） 08（57.14）
Middle 27 15（55.56） 12（44.44）
Low 09 06（66.67） 03（33.33）
T installment 3.628 0.057
17 06（35.29） 11（64.71）
T1+2
33 21（63.64） 12（36.36）
T3+4
Lymph node metastasis 5.265 0.022
Exist 24 17（70.83） 07（29.17）
No 26 10（38.46） 16（61.54）
Distant transfer 5.469 0.019
Exist 12 10（83.33） 02（16.67）
No 38 17（44.74） 21（55.26）
5⁃year survival rate 4.428 0.035
Survival 29 12（41.38） 17（58.62）
Death 21 15（71.43） 06（28.57）