Page 56 - 《南京医科大学学报》2026年第1期

第46卷第1期
· 50 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年1月

1.2.9 病毒感染实验 统计学分析采用 GraphPad Prism 9 软件进行。
将处于对数生长期的THP⁃1细胞以适量密度接 两组间比较采用独立样本t检验；3组及以上数据比
种于培养板中，24 h后以感染复数（multiplicity of in⁃ 较采用单因素方差分析，若满足方差齐性，则进一
fection，MOI）=1 加入用无血清 Opti⁃MEM 培养基稀 步采用LSD⁃t或SNK⁃q法进行两两比较；涉及不同时
释的DBV病毒液。于37 ℃、5% CO2培养箱中孵育2 h 间点重复测量的数据采用重复测量方差分析；若数
以完成病毒吸附。随后，吸弃病毒液，用PBS轻轻洗 据不满足正态分布或方差齐性假设，则改用非参数
涤细胞2次，以彻底去除未吸附的病毒。最后，更换 检验（如 Kruskal⁃Wallis 检验或 Mann⁃Whitney U 检
为含 2%胎牛血清的完全培养基，继续培养至指定 验）。P < 0.05为差异有统计学意义。
时间点，收集细胞样品用于后续分析。
2 结 果
本研究所涉及的 DBV 属于高致病性病原体，
根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》规 2.1 DBV感染下调PCBP2表达并诱发铁死亡
定需在生物安全等级三级（BSL⁃3）的实验室中进 为明确 DBV 感染对 PCBP2 表达及铁死亡的影
行操作。所有活病毒实验均在符合中国和世界 响，首先检测了感染后不同时间点 PCBP2 的 mRNA
卫生组织规范的 BSL⁃3 实验室内完成。实验人员 和蛋白水平。结果显示，DBV 感染 THP⁃1 细胞后，
穿戴个人防护装备，并在二级生物安全柜内进行 PCBP2 的 mRNA 及蛋白表达水平均下调，且随着感
所有操作。病毒培养物和废弃物均经高压蒸汽 染时间增加，表达水平逐渐下降（图 1A~C）。透射
灭菌处理。 电镜观察显示，DBV感染可诱导典型的铁死亡相关
1.3 统计学方法 形态学变化，包括线粒体嵴的缺失、线粒体肿胀以
所有实验均独立重复至少 3 次。对于每次实 及外膜破裂（图1D）。
验，技术重复的数据先计算平均值作为该实验的代 2.2 PCBP2稳转细胞系的构建与验证
表值，最终结果以独立实验的均值±标准差（x ± s）表 为研究 PCBP2 在 DBV 感染中的功能，构建了
示。若出现明显异常值（>3个标准差），经确认后予 PCBP2过表达（PCBP2 ）和敲低（PCBP2 ）的THP⁃1
-/-
OE
以剔除。 稳转细胞系。qRT⁃PCR和Western blot结果（图2）证
A B C
***
1.5 *** *** *** Control 6 h 12 h 24 h 48 h 1.5 *** ***
Relative expression of PCBP2 mRNA 1.0 *** β⁃Actin 41 kDa Relative expression of PCBP2/β⁃Actin 1.0 ***
PCBP2
42 kDa
0.5
0.5
0 0
Control 6 h 12 h 24 h 48 h Control 6 h 12 h 24 h 48 h
D ×1 200 ×10 000 ×30 000

Control

DBV

***
A：Changes in mRNA levels of PCBP2 at different time points after DBV infection， P < 0.001（n=3）. B：Changes in protein levels of PCBP2 at
***
different time points after DBV infection. C：Quantitative data were obtained by densitometry of Western blot and normalized to β⁃Action， P < 0.001
（n=3）. D：Transmission electron microscopy images of THP⁃1 cells with or without DBV infection（boxes indicate mitochondrial morphology）.
图1 DBV感染对PCBP2及铁死亡的影响
Figure 1 Effects of DBV infection on PCBP2 and ferroptosis