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第46卷第10期 王娓娓，赵 坤，李云霞，等. Th22细胞联合循环肿瘤细胞对胃癌腹膜转移的预测价值［J］.
2026年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（10）：1545-1552 ·1547 ·

①合并其他原发恶性肿瘤或有相关病史；②术前 37 ℃孵育 1 h，PBS 洗涤 3 次后，在荧光显微镜（型
1 个月内使用免疫调节剂、激素等影响免疫细胞的 号：Olympus BX53）下观察；以 CK 阳性、CD45 阴性、
药物；③存在严重感染、自身免疫病或炎症急性发 DAPI 阳性且形态符合肿瘤细胞特征（细胞体积较
作；④合并严重肝肾功能不全、凝血障碍；⑤临床资 大、核质比高）的细胞判定为 CTC，由 2 名经验丰富
料不全或关键数据缺失。本研究经淮安市淮安医 的病理科医师双盲计数，若2人计数结果差异>10%，
院伦理委员会批准（批件号：2022030），患者均知情 则由第 3 名医师复核确定最终计数结果，以 CTC 数
同意。 量≥1个/7.5 mL外周血判定为CTC阳性 。
［9］
1.2 方法 1.2.3 腹膜转移的诊断及分组
1.2.1 患者基线资料收集 胃癌患者腹膜转移的诊断参照《胃癌腹膜转移
［10］
收集患者的个人信息（即年龄、性别、体重指 防治中国专家共识》 ，采用多维度检查手段综合
数）、肿瘤特征（即位置、大小、TNM分期、病理类型、 判定：术前通过腹部增强 CT 评估腹膜增厚、腹水及
分化程度、淋巴浸润）、临床检验指标［包括白细胞 腹腔结节情况，若发现腹膜呈饼状增厚、腹腔内直
计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、血小板计 径≥5 mm结节或不明原因血性腹水，则初步提示腹

数、单核细胞计数、CEA、CA199、甲胎蛋白（alpha⁃ 膜转移；对于术前未明确转移但临床高度怀疑的患
fetoprotein，AFP）］水平。 者，进一步行腹腔镜探查，直视下观察腹膜表面是

1.2.2 外周血Th22细胞和CTC检测 否存在转移灶，对可疑病灶取组织进行病理活检；
本研究中对 Th22 细胞与 CTC 的检测基于本单 术后对手术切除的腹膜组织及腹腔淋巴结标本进
位回顾性胃癌生物标志物临床研究数据库中保存 行常规病理切片检查，以病理组织学发现胃癌细胞
的外周血样本及对应的历史检测数据。该数据库 浸润作为腹膜转移的金标准。所有诊断结果均由
常规收集胃癌患者的临床资料及治疗前的外周血 2 名副主任医师及以上职称的影像科医师、1名主任
样本，用于 Th22 细胞、CTC 等新型生物标志物的探 医师级别的病理科医师共同审核，意见不一致时通
索性研究。所有样本均于患者入院后第2天清晨空 过科室病例讨论达成共识。根据腹膜转移诊断结
腹状态下采集外周静脉血10 mL（EDTA抗凝），其中 果，将所有纳入患者分为两组：转移组（38 例）和未
5 mL 用于 Th22 细胞检测，5 mL 用于 CTC 检测。样 转移组（82例）。
本采集后均在2 h内完成处理以保证细胞活性。 1.3 统计学方法
Th22 细胞检测采用流式细胞术。取 5 mL 外周 采用SPSS27.0软件进行数据分析，使用Kolmogorov⁃
血，经 EDTA 抗凝后，按照人外周血单个核细胞 Smirnov 检验对连续变量进行正态性检验。正态分
（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）分离试剂 布数据用均数±标准差（x ± s）表示，独立样本t检验
盒说明书操作，通过密度梯度离心法分离PBMC；向 进行组间比较；计数数据用例数（百分率）［n（%）］
分离后的细胞悬液中加入荧光标记的特异性抗体 表示，χ 检验进行组间比较。采用Logistic回归分析
2
（CD4⁃FITC、IL⁃22⁃PE），4 ℃避光孵育30 min，随后用 模型评估胃癌腹膜转移的独立危险因素。采用
磷酸盐缓冲液洗涤2次，去除未结合抗体；采用流式 Spearman或Pearson相关系数分析Th22细胞比例和
+ CTC 计数与胃癌腹膜转移独立危险因素的相关性。
细胞仪（型号：BD FACSCanto Ⅱ）进行检测，以CD4
IL⁃22 细胞定义为 Th22 细胞，通过 FlowJo 软件分析 绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic，
+
Th22细胞占外周血CD4 T细胞的百分比，每个样本 ROC）曲线评估Th22细胞比例和CTC计数对胃癌腹
+
重复检测3次，取平均值作为最终结果。 膜转移的预测价值。P < 0.05为差异有统计学意义。
CTC检测采用免疫磁珠分选联合免疫荧光染色
2 结 果
法。取7.5 mL外周血，加入EDTA抗凝后，使用CTC
富集试剂盒（广州益善生物技术股份有限公司，货 2.1 两组患者的基线特征比较
号：SE⁃001），通过磁珠特异性结合肿瘤细胞表面上 与未转移组相比，转移组低分化、浸润深度T2、
皮细胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule， 淋巴管侵犯比例增加，淋巴结转移数量增多，CEA、
EpCAM），离心富集 CTC；将富集后的细胞涂片，室 CA199 水平升高，Th22 细胞比例、CTC 计数增加，差

温固定 15 min，加入细胞角蛋白（cytokeratin，CK）⁃ 异有统计学意义（P 均 < 0.05），其余指标之间的差
Alexa Fluor 488、CD45⁃PE⁃Cy5 荧光抗体和 DAPI， 异均无统计学意义（P均 > 0.05，表1）。