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第46卷第10期 段学诚，孟 艳. 过氧化物还原酶4蛋白在衰老小鼠卵巢颗粒细胞中的核转位研究［J］.
2026年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（10）：1450-1456 ·1451 ·

was successfully constructed. Nuclear⁃cytoplasmic separation experiments further showed that the content of PRDX4 protein in the
nucleus of the aging group was significantly higher than that in the young group（P < 0.01），while the corresponding decrease in the
cytoplasm indicated that PRDX4 was translocated from the cytoplasm to the nucleus. Conclusion： Aging can induce the translocation
of PRDX4 from cytoplasm to nucleus in ovarian GCs and its nuclear translocation may be involved in the regulation of ovarian aging.
［Key words］ ovarian aging；granulosa cells；cellular senescence；PRDX4；nuclear translocation
［J Nanjing Med Univ，2026，46（10）：1450⁃1456］

卵巢衰老是指随着年龄增长，卵巢功能逐渐衰 暗交替，环境温度 20~22 ℃，相对湿度 50%~70%。
退的过程，其主要表现为卵泡储备减少、卵母细胞 小鼠自由进食普通饲料，饮用酸化灭菌水；定期更
质量下降、类固醇激素合成紊乱，最终导致生育力 换笼具以保证活动空间。所有动物实验操作均已
下降 ［1-2］ 。颗粒细胞（granulosa cell，GC）是卵泡微 获得南京医科大学动物实验伦理委员会的批准（批
环境中的核心支持细胞，通过缝隙连接与卵母细 号：IACUC⁃2404035）。
胞进行物质及信号交换，在卵泡发育及卵母细胞 1.1.2 试剂
成熟中发挥关键作用。因此，阐明 GC 衰老的分子 实验所用主要试剂包括：DMEM/F⁃12 培养液、
机制，对于理解卵巢衰老及相关生殖障碍具有重 磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）、杜氏
［3］
要意义 。 磷 酸 盐 缓 冲 液（Dulbecco’s phosphate buffered sa⁃
过氧化还原酶 4（peroxiredoxin 4，PRDX4）是过 line，DPBS）（Gibco 公司，美国）；胎牛血清（Sigma 公
氧化物还原酶家族中的重要成员，主要作用是清除 司，美国）；青霉素⁃链霉素⁃新霉素及 0.25%胰酶（含
细胞内的活性氧（reactive oxygen species，ROS）及氧 EDTA）、毒胡萝卜素（thapsigargin，Tg）（MCE 公司，
化还原稳态的维持 ［4-5］ 。既往研究表明，PRDX4 除 美国）；0.9%氯化钠（TCI公司，日本）；RIPA裂解液、
具有经典抗氧化功能外，还可在特定应激条件下发 蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物、0.5% Triton X⁃100、免
生定位改变 ［6-7］ ；例如，在模拟缺氧条件下已观察到 疫荧光封闭液、DEPC 水及增强型 DAB 显色试剂盒
其核转位现象，提示其可能参与核内的转录调控或 （上海碧云天公司）；抗荧光淬灭封片剂（上海翌圣
DNA 保护功能 。然而，在衰老过程中，PRDX4 是 公司）；细胞核蛋白/浆蛋白提取试剂盒及三色预染
［7］
否发生由胞质向细胞核的转位，以及其是否与 GC 蛋白 Marker（上海雅酶公司）；SYBR Premix Ex Taq
衰老表型直接相关，尚缺乏明确证据。 （TaKaRa 公司，日本）；Western blot 制胶试剂盒及快
9月龄小鼠已被广泛用作卵巢生殖衰老模型 ［8-10］ 。 速封闭液（常州伯仪）；2，2，2⁃三溴乙醇、叔戊醇（2⁃
本研究以此为基础，结合自然衰老小鼠卵巢组织与 甲基⁃2⁃丁醇）（TCI 公司，日本）；HI Script Ⅲ RT Su⁃
KGN 细胞体外衰老模型，通过免疫荧光染色、核质 per Mix 逆转录试剂盒、2×ChamQ Universal SYBR
分离及Western blot等技术，检测年轻与衰老状态下 qPCR Master Mix（南京诺唯赞），KGN 细胞（上海中
GC 中 PRDX4 在胞质与细胞核的分布差异，旨在明 乔新舟）。P16、P21、P53 抗体（Abcam 公司，英国）；
确衰老是否诱导PRDX4发生核转位，并初步分析其 GAPDH 抗体、FSHR抗体、PRDX4抗体、Lamin B1抗
与 GC 衰老表型的关系，为阐明卵巢衰老的分子机 体、HRP标记的山羊抗兔IgG及Alexa Fluor 594标记
制提供新的实验依据。 的山羊抗兔 IgG（武汉 Protein Tech公司）；FSHR抗体
（武汉ABclonal公司）。
1 材料和方法
1.2 方法
1.1 材料 1.2.1 麻醉药的制备
1.1.1 实验动物 称取2，2，2⁃三溴乙醇25 g，溶解于15.5 mL叔戊
实验所用动物为6周龄和9月龄的无特定病原 醇中，配制成储备液，于低温避光条件下保存。临
体（specific pathogen free，SPF）级 雌 性 C57BL/6 小 用时取适量储备液稀释至工作浓度。
鼠，由南京医科大学实验动物中心提供。小鼠饲养 1.2.2 小鼠卵巢的分离
于标准SPF级动物房，光照周期为12 h光照/12 h黑 选取 6 周龄和 9 月龄的雌性 C57BL/6 小鼠，按