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第46卷第10期 段学诚，孟 艳. 过氧化物还原酶4蛋白在衰老小鼠卵巢颗粒细胞中的核转位研究［J］.
2026年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（10）：1450-1456 ·1453 ·

60 s，95 ℃ 15 s。 分析，若整体差异有统计学意义，则进一步采用
1.2.10 细胞核蛋白/浆蛋白提取 Tukey 法进行组间两两比较（多重比较）。P < 0.05
收集细胞，PBS 重悬后取 2×10 个细胞，离心弃 为差异有统计学意义。
6
上清。按核蛋白提取试剂盒说明书操作：依次加入
2 结 果
试剂 A 和 B，冰上孵育后离心，取上清即为胞浆蛋
白；沉淀经试剂 A 洗涤后，加入试剂 C 提取核蛋白， 2.1 老龄小鼠卵巢GC中PRDX4的核转位变化
冰上反复涡旋，离心取上清即为核蛋白。Western 通过免疫荧光染色，分别检测年轻组与老龄组
blot检测PRDX4在胞浆与胞核中的分布变化。 小鼠卵巢 GC 中 PRDX4 的核转位现象。结果显示，

1.3 统计学方法 在年轻组小鼠卵巢 GC 中 PRDX4 主要分布于胞质，
采用 GraphPad Prism 10.0 软件进行统计分析， 细胞核内荧光信号微弱；而在老龄组中PRDX4在细
所有数据以均值±标准误（x ± sx）表示。两组间比较 胞核内信号显著增强。这表明，随着衰老进展，小
采用独立样本 t 检验，多组间比较采用单因素方差 鼠卵巢GC中PRDX4发生明显的核转位（图1）。

DAPI PRDX4 Merge Amplification
（%） 100 **
Relative 80
Young 60
PRDX4 fluoresent intensity 20
40

0
Young Aged

Aged

**
MFI quantitative analysis（Scale bar：60 μm）；compared with the young group，P < 0.01（n=4）.
图1 老龄小鼠卵巢GC中PRDX4的核转位变化
Figure 1 Changes in PRDX4 nuclear translocation in ovarian GCs of aged mice

2.2 Tg诱导KGN细胞衰老模型的建立 处理 24 h 作为稳定诱导 GC 衰老的最佳实验条件。
KGN 细胞贴壁生长良好，形态均一，多呈梭形 在此条件下，验证显示 P16、P21 和 P53 蛋白表达均
或多角形，符合 GC 的典型形态学特征（图 2A）。 显著高于对照组（图 3C），以上结果表明，成功建立
免疫荧光双重染色显示，KGN 细胞 FSHR 表达呈阳 了基于Tg诱导的KGN细胞衰老模型 ［11-16］ 。
性（图 2B）。采用不同浓度、不同时间的 Tg 处理 2.4 衰老KGN细胞中PRDX4核转位的影响
KGN 细胞，CCK⁃8 结果显示，综合浓度与时间因 核质分离结合Western blot结果显示，与对照组
素，排除过高浓度（≥250 nmol/L）所致过度损伤、过 相比，衰老组细胞核中 PRDX4 蛋白含量显著增加，
低浓度（50 nmol/L）或过短时间（12 h）诱导不足、以及 而胞质中相应减少，进一步证实衰老可诱导PRDX4
过长处进（≥48 h）可能引发的自我修复干扰，初步选 由胞质向细胞核转位（图4）。
定125 nmol/L、24 h为候选条件，并进一步通过衰老标
3 讨 论
志物验证（图2C）。
2.3 Tg诱导KGN细胞衰老模型的验证 本研究从小鼠卵巢组织及 KGN 细胞两个层面
在上述条件下，进一步检测衰老相关指标。 证实，衰老可显著促进 GC 中 PRDX4 由胞质向细胞
结果显示，与对照组相比，该条件下 SASP 相关基 核转位。这一发现提示，PRDX4 的核转位可能是
因（IL⁃1α、IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃8）mRNA 的表达水平显著 GC应对衰老或长期性氧化应激的一种适应性机制，
升高（图 3A），同时衰老相关蛋白 P16、P21 及 P53 的 为理解PRDX4在卵巢衰老中的作用提供了新见解。

表达也显著增加（图 3B）。据此确定 125 nmol/L Tg PRDX4主要定位于内质网腔，通过清除过氧化