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第46卷第10期           李  易，商   艳，陆    超. 转录因子ZNF326在急性T淋巴细胞白血病细胞中的致病作用
                 2026年10月                 研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（10）：1492-1498                 ·1493 ·


                a novel therapeutic target for T⁃ALL.
               ［Key words］ T⁃cell acute lymphoblastic leukemia；ZNF326；proliferation；apoptosis；cell cycle
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2026，46（10）：1492⁃1498］







                    急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leu⁃            朗生物科技有限公司）；ZNF326 siRNA 及阴性对照
                kemia，ALL）是一种淋巴祖细胞的血液系统恶性肿                       （湖州河马生物科技有限公司）；过表达质粒（上海和
                瘤。随着基因分析技术的不断进步，目前已识别出                            元生物技术股份有限公司）；TRIzol试剂、qRT⁃PCR试
                                                           ［1］
                超过 23 种 B 细胞亚型和 17 种 T 细胞 ALL 亚型 。                剂 盒（TaKaRa 公 司 ，日 本）；逆 转 录 试 剂 盒 、2×
                急性 T 淋巴细胞白血病（T⁃cell acute lymphoblastic           RealStarPower SYBR qPCR Mix（南京诺唯赞生物科
                                                ［2］
                leukemia，T⁃ALL）是一种高风险肿瘤 ，肿瘤细胞大                    技股份有限公司）；Lipofectamine 3000 转染试剂
                量增殖并在骨髓聚集，可导致贫血、出血、感染及组                          （Invitrogen 公司，美国）；SDS⁃PAGE 凝胶试剂盒（北
                织浸润等一系列临床表现            ［3-4］ ，易发生原发耐药、诱           京索莱宝科技有限公司）；ZNF326、丝氨酸蛋白酶抑
                导失败、中枢浸润、早期复发等。目前，骨髓移植、                           制剂 B2（serpin family B member 2，SERPINB2）及内
                嵌合抗原受体T细胞疗法、免疫治疗及化疗技术的进                           参 GAPDH 抗体（武汉三鹰生物技术有限公司）；
                步显著提升了T⁃ALL的治疗效果，但是肿瘤复发、耐                         HRP标记山羊抗兔二抗（杭州华安生物有限公司）。
                药与转移仍是影响患者预后的难题 。靶向治疗作                            1.2  方法
                                               ［5］
                为新一代肿瘤治疗方案，能够在提升杀伤效果的同时                           1.2.1 细胞培养
                降低对正常组织的损伤，但其分子机制尚未得到充分                               Jurkat细胞采用RPMI⁃1640培养基培养，培养基
                阐明，深入解析分子机制将为靶向治疗提供理论依                            中添加10%胎牛血清和1%的双抗（青霉素⁃链霉素），
                据，使靶向治疗成为T⁃ALL极具潜力的新治疗方向。                         置于37 ℃、5% CO2恒温培养箱中常规培养。
                    锌指蛋白 326（zinc finger protein 326，ZNF326）      1.2.2 细胞转染和慢病毒感染
                是编码锌指蛋白的转录因子之一，可通过其锌指结                                si⁃RNA 转染：将 Jurkat 细胞按适宜密度接种于
                构与特定的DNA序列相互结合，并以锌依赖方式表                           6 孔板中，继续培养20 h至细胞融合度为30%~60%。
                                                           ［6］
                现出DNA结合活性，在调节细胞生长中发挥作用 。                          参照 Lipofectamine 3000 转染试剂说明书进行转染操
                ZNF326在肺癌、乳腺癌、胶质瘤等多种恶性肿瘤中                         作。实验分为3组：阴性对照组（si⁃NC，转染非靶向
                呈现高表达，并具有促进肿瘤细胞恶性表型的作                             siRNA）、Jurkat组、ZNF326敲低组（si⁃ZNF326）。转染
                用 ［7-9］ 。但ZNF326在T⁃ALL中的生物学功能及发挥                  后继续培养 48 h，收集细胞用于后续实验。siRNA
                作 用 的 分 子 机 制 尚 不 清 楚 。 本 研 究 旨 在 阐 明             序列如表1所示。
                ZNF326在T⁃ALL进展中的生物学功能，为T⁃ALL靶                         慢病毒感染：实验同样分为 3 组，阴性对照组
                向治疗提供实验依据和新方向，并为锌指蛋白家族                           （LV⁃NC）、Jurkat组、ZNF326过表达组（LV⁃ZNF326）。
                成员的抗肿瘤研究拓展新方向。                                    将过表达质粒和包装质粒共转染 293T 细胞进行慢
                                                                  病毒包装，将得到的病毒液进行浓缩用于后续感
                1  材料和方法
                                                                  染。将Jurkat细胞培养到30%~50%的密度铺在6孔
                1.1  材料                                           板中，以感染复数（multiplicity of infection，MOI）为 5
                    人白血病T淋巴细胞Jurkat、293T细胞（上海赛百                   的标准将对应量的病毒液与培养液混合，再加入终
                慷生物技术股份有限公司）；胎牛血清和青霉素⁃链霉                          浓度为 5~8 μg/mL 的 Polybrene，最后一起加入孔板
                素双抗溶液（Gibco 公司，美国）；RPMI⁃1640 培养基                  中，放入平角离心机500~1 000 g离心1 h，增强病毒
               （Hyclone公司，美国）；CCK⁃8试剂盒（同仁化学研究                     和细胞的接触，最后放入培养箱培养。转染 6 h 后
                所，日本）；RIPA 裂解液和 BCA 蛋白浓度测定试剂                      换液，12 h后可在荧光显微镜下观察感染效率；之后
                盒均（上海碧云天生物技术有限公司）；牛血清白蛋                           收集细胞用于后续实验。
                白（bovine serum albumin，BSA）（合肥白鲨生物科技              1.2.3 Western blot实验检测蛋白表达
                有限公司）；Annexin V⁃FITC/PI 双染试剂盒（上海康                     收集细胞，预冷PBS洗涤2次，离心去除上清，加
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