Page 60 - 《南京医科大学学报》自然科学版2026年第2期

第46卷第2期
·216 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年2月

2.3 筛选细胞荧光强度较强的孔 2.4 筛选细胞正常增殖的孔
细胞转移至新孔后，再次成像。软件分析各孔 首次消化传代后9 d，细胞增殖最快的孔已增殖至
内细胞平均荧光强度（图 3），按照其数值由大到小 总数为消化传代后的4~8倍，再次成像。以稳定转染
排序，筛选出对应原单细胞分离微孔板（简称“原 细胞的增殖速度为参照，从上一步筛选出的6个孔中
板”）B4、C6、F2、F3、G5、G11 的 6 个孔。图 4 显示来 进一步筛选出对应原板B4、F3、G5孔的细胞能正常增
源于原板B4孔的细胞转移至新孔的成像。 殖的3个孔。图5显示来源于原板B4孔的细胞成像。

图3 各孔内细胞平均绿色荧光强度
Figure 3 Mean green fluorescence intensity of cells in each well

图4 克隆团细胞消化后在新孔培养的荧光和明场成像
Figure 4 Fluorescence and bright⁃field imaging of cells from a clonal cluster following trypsinization and transfer to a new well

图5 能正常增殖的单克隆细胞的荧光和明场成像
Figure 5 Fluorescence and bright⁃field imaging of monoclonal cells which could proliferate normally

2.5 流式检测鉴定细胞株荧光强度 信，但通过明场成像观察细胞不如荧光成像那样一
分选后 48 d，单克隆细胞株细胞数达到流式细 目了然，分析软件自动计算各孔细胞汇合度，汇合
胞术检测要求。图 6 显示流式细胞术检测稳定转 度值可用于衡量细胞数变化 ［15］ ，稳定转染细胞与单
染细胞与筛选出的 3 个单克隆细胞株（细胞株 1、 克隆细胞在当前孔内的汇合度分别为43%、42%，因
2、3 分别对应原板 B4、F3、G5 孔的细胞）的 GFP 信 此可认为两孔内细胞数量相近。图7显示单克隆细
号，检测条件完全一致。3 个单克隆细胞株的细胞 胞株（以来源于原板 B4 孔的细胞株为例）的荧光信
GFP 信号均值分别为 16 214、13 866、16 900，相比 号强度显著高于稳定转染细胞。
稳定转染细胞的GFP信号均值1 597，数值提高了近
3 讨 论
9 倍。3 个单克隆细胞株中高表达 GFP 细胞的占比
分别为 99.8%、97.7%、99.4%，均远高于稳定转染细 分离单细胞可用极限稀释法、流式单细胞分选
胞对应的数值15.7%。 等完成。相对而言，极限稀释法虽然较温和，但该
［9］
2.6 荧光成像鉴定细胞株荧光强度 方法预估只有 1/3 的孔含有单细胞 ，因而成功率
分选后 57 d，将等数量的稳定转染细胞与单克 较低 ［16］ 。而流式分选具有高通量、分选速度快的
隆细胞接种于96孔板，通过微孔板成像系统成像比 优势 ［17］ ，与极限稀释法相比省时、省力，而且可以分
较其荧光信号。由于在孔内细胞总数相近的前提 离荧光强的单细胞，近年来被广泛使用于多个科学
下用荧光成像比较不同细胞样本的荧光强度更可 研究领域 ［18］ 。若流式细胞仪性能良好且操作规范，