Page 40 - 南京医科大学自然版

第46卷第9期
·1310 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年9月

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2.3 ReN⁃NV 和 RVG⁃ReN⁃NV 能够减轻 MPTP 造成 子机制，利用 MPTP 的活性代谢产物 MPP 处理 SH⁃
的纹状体区域损伤 SY5Y 神经母细胞瘤细胞，以建立 PD 的体外细胞模
鉴于黑质⁃纹状体通路是 PD 病理的核心，本研 型。首先，用不同浓度（0.25、0.50、1.00、2.00 mmol/L）
究进一步检测了纹状体区域的神经损伤情况。免 MPP 分别处理 SH⁃SY5Y 细胞以确定其有效损伤浓
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疫荧光染色结果显示，MPTP引起纹状体中TH阳性 度。结果显示，1 mmol/L MPP 处理能够引起细胞明
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神经元显著减少，ReN⁃NV治疗后TH阳性神经元荧 显的形态皱缩（图4A），并以剂量依赖的方式降低细
光强度呈恢复趋势，但未达到统计学差异;相比之 胞活力、增加 LDH 释放（图 4B）。基于 1 mmol/L

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下，RVG⁃ReN⁃NV 治疗可显著恢复MPTP诱导的TH MPP 能够显著抑制 SH⁃SY5Y 细胞增殖活力，选用
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阳性神经纤维丢失(图 3A、B)。进一步通过 Western 1 mmol/L MPP 进行后续的机制研究。结果显示，
blot 检测了 TH 蛋白的表达水平。结果再次证实， ReN⁃NV能够显著逆转由MPP 引起的细胞活力下降
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RVG⁃ReN⁃NV 可显著逆转 MPTP 诱导的 TH 蛋白表 （图 4C），这证实了其在体外同样具有神经保护效
达下调，而 ReN⁃NV 仅表现出一定的恢复趋势(图 应。miRNA 是 EV 发挥作用的主要生物调节因子，
3C、D)，从蛋白水平上确证了 RVG⁃ReN⁃NV 对多巴 推测 miRNA 在 ReN⁃NV 减轻 PD 症状的过程中发挥
胺能神经元具有更好的保护能力。 着重要作用，结合课题组前期研究结果发现，与
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2.4 ReN⁃NV通过递送let⁃7i⁃5p抑制MPP 诱导的神 HEK293细胞来源的NV（HEK293⁃NV）相比，有32种
经元凋亡从而发挥体外保护作用 miRNA在ReN⁃NV中显著上调或下调 ［23］ 。首先筛选
为了体外探究ReN⁃NV的直接保护作用及其分 出 ReN⁃NV 中相对于 HEK293⁃NV 显著上调的 13 个

A TH DAPI Merge B 1.5
Normalized fluorescence intencity of TH 0.5
Control ** *

50 μm 1.0

PBS

Control MPTP+RV
MPTP+RVG⁃RV
MPTP+PBS
50 μm 0
MPTP RV
D
1.5
50 μm *** **

RVG⁃RV Relative protein level of TH 1.0

50 μm 0.5
C MPTP
Control PBS RV RVG⁃RV
0
MPTP+PBS
TH 60 kDa Control MPTP+RV
β⁃actin 42 kDa MPTP+RVG⁃RV
A：Immunofluorescence images of the striatal region after MPTP administration，showing TH（red）and nuclei counterstained with DAPI（blue）.
Scale bar：200 μm. B：Quantitative analysis of TH⁃positive cells in the striatum. C，D：Western blot analysis of TH expression in the striatal region and
*
**
corresponding quantification，with β⁃actin used as the loading control. P < 0.05，P < 0.01，and *** P < 0.01（n=3）.
图3 ReN⁃NV和RVG⁃ReN⁃NV能够减轻MPTP造成的纹状体区域的损伤
Figure 3 ReN⁃NV and RVG⁃ReN⁃NV could alleviate the damage in the striatum area caused by MPTP