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第46卷第9期
               ·1312 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2026年9月


              指标检测结果也显示，过表达let⁃7i⁃5p能显著下调凋                      TH 阳性神经元的共定位关系仍有待进一步明确。
              亡蛋白 Caspase⁃3 的表达（图 4G、H）。为明确 let⁃7i⁃             采用高分辨率共聚焦显微镜结合TH阳性神经元标
              5p对神经炎症的影响，使用体外检测let⁃7i⁃5p mimic                  记进行共定位分析，是验证RVG修饰靶向性的关键
              对BV2细胞激活的影响，并检测IL⁃1β和IL⁃6 mRNA                    手段。后续研究将采用该方法，进一步明确 RVG⁃
              表达的变化。RT⁃qPCR 检测结果显示，经 1 mmol/L                   ReN⁃NV在特定脑区的分布特征及其对多巴胺能神
              MPP 处理，BV2 细胞中 IL⁃1β和 IL⁃6 mRNA 表达水               经元的靶向能力。
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              平均明显升高；与 NC+MPP 组相比，let⁃7i⁃5p mimic                    在机制层面，本研究揭示了 ReN⁃NV 通过其内
              转染显著抑制了MPP 诱导的IL⁃1β的表达（图4I、J）。                    在富集的 miRNA let⁃7i⁃5p 发挥保护效应，提示 let⁃
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                  综上所述，这些体外实验结果提示了一种潜在                          7i⁃5p 被递送至受损神经元和炎症激活的小胶质细
              的作用机制：ReN⁃NV可将其内富含的let⁃7i⁃5p有效                    胞中，一方面通过调控 Bcl⁃2/Bax 比值及 Caspase⁃3
              递送至受损神经元和炎症激活的小胶质细胞中，一                            信号轴抑制细胞凋亡，另一方面显著下调 IL⁃1β的
              方面通过调控 Bcl⁃2/Bax 比值及 Caspase⁃3 信号轴抑               表达水平，减轻炎症反应，最终阻止了神经元死亡
              制细胞凋亡，另一方面显著下调IL⁃1β的表达水平，                         的进程。尽管本研究结果提示let⁃7i⁃5p可能参与调
              减轻炎症反应。上述抗凋亡与抗炎作用协同发挥，                            控 Bcl⁃2/Bax/Caspase⁃3 凋亡信号通路，但其与上述
              从而共同介导其神经保护效应。                                    凋亡相关基因之间是否构成直接的靶向调控关系
                                                                尚不明确，相关效应也可能通过间接机制介导。后
              3 讨    论
                                                                续研究将通过荧光素酶报告基因实验或功能缺失
                  EV作为细胞间通讯的重要载体，是所有细胞都                         方法对此进行深入验证。此外，本研究主要基于
              能够释放的一类细胞间信息交流载体，并且具有很                            Bcl⁃2/Bax 比值及 Caspase⁃3 表达水平评估细胞凋
              大的应用前景      ［24］ ，然而，EV 的大规模生产仍然是一                亡。上述分子均为线粒体凋亡通路中的关键调控
              个挑战。最近，通过挤压细胞制备的外泌体模拟                             因子，其表达变化已被广泛用于反映细胞凋亡状
              NV已成为临床规模生产的一种替代策略                  ［23］ 。PD是     态，是当前凋亡研究中常用的评价方法之一                   ［29-30］ 。为
              一种与年龄相关的神经退行性疾病，临床表现为静                            进一步验证 ReN⁃NV 的抗凋亡作用，后续研究将结
              息性震颤、运动迟缓、僵硬等，病理表现为黑质的多                           合 Annexin V⁃PI 流式细胞术或 TUNEL 染色等直接
              巴胺能神经元逐渐丧失           ［25-26］ 。尽管近几十年来提出           检测方法进行深入分析。
              了多种可能的发病机制，如酶促多巴胺分解过程中                                 干细胞来源的细胞外囊泡被公认为有前景的
              的极端氧自由基释放、线粒体功能损伤以及神经炎                            疗法，但其脑部靶向性差是限制其临床转化的主要
              症等，但在近几十年里，对于PD的病因仍缺乏充分                           瓶颈。首先，本研究采用 RVG 肽对 ReN⁃NV 进行修
              的认识   ［26-27］ 。同时，大量研究也已证实miRNA 的表                饰，成功实现了 NV 的主动脑靶向递送。RVG 通过
              达失调是 PD 的关键病理环节之一，直接参与调控                          特异性结合神经细胞表面的烟碱型乙酰胆碱受体，
              α⁃突触核蛋白（α⁃synuclein）的聚集、线粒体功能障                    使其能够高效跨越血脑屏障，这与目前多数依赖被
              碍和神经炎症，使其成为极具吸引力的治疗靶点 。                           动靶向或磁性靶向的 PD 治疗策略形成了鲜明差
                                                        ［28］
                  本研究创新性地探索了 ReN⁃NV 在 PD 治疗中                    异，这一主动靶向机制极大地提高了药物在病灶区
              的潜力。体内外实验结果一致表明，ReN⁃NV 具有                         的生物利用度和治疗窗口。其次，本研究不仅论述
              显著的内源性神经保护作用，能有效缓解 MPTP 诱                         了 ReN⁃NV 的治疗作用，更进一步精准锁定了其发
              导的PD 动物模型中纹状体和黑质多巴胺能神经元                           挥保护作用的核心分子机制。本研究结果提示其
              的损伤，或 MPP 诱导的 PD 细胞模型中细胞活力下                       内源性携带的let⁃7i⁃5p是ReN⁃NV的核心效应分子，
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              降。为解决 NV 中枢递送效率低的问题，成功构建                          并阐明了let⁃7i⁃5p通过Bcl⁃2/Bax凋亡通路抑制神经
              了表面修饰有 RVG 的 RVG⁃ReN⁃NV。体内实验证                     元死亡这一调节机制。这种“囊泡⁃miRNA⁃通路”的
              实，RVG 修饰提高了 NV 穿透血脑屏障且靶向神经                        完整机制链条的揭示，使得该治疗策略建立在坚实
              元的能力，从而显著提升了其在 PD 动物模型中的                          的分子生物学基础上，超越了仅停留在细胞旁分泌
              治疗效果。尽管本研究通过荧光示踪初步证实了                             效应层面的传统解释。尽管本研究取得了积极成
              RVG⁃ReN⁃NV 在脑组织中的整体富集分布情况，但                       果，但仍存在一些局限性。例如，RVG 修饰后的囊
              其在黑质及纹状体等特定脑区的精细分布及其与                             泡其长期体内稳定性、代谢途径和潜在的免疫反应
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