Page 62 - 南京医科大学自然科学版第1期

第41卷第1期
· 56 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年1月

率（%）=（干扰样本实测浓度-样本理论浓度）/样本 25 000
配方1
理论浓度×100%。 配方2
20 000 配方3
1.2.3 临床性能评价 配方4
收集 2018 年 2—9 月来南京医科大学附属无锡 15 000 配方5
配方6
人民医院就诊的 136 例孕妇（年龄 18~45 岁、孕周 荧光信号值 10 000 配方7
配方8
20~34 周）的血清样本（不少于 0.5 mL）；采集的血 配方9
+6
配方10
清在-20 ℃条件下冷冻保存，1个月内进行检测。每 5 000 配方11
份血清样本均采用荧光免疫层析法与电化学发光 配方12
0
试剂法平行检测，考察两种检测方法的相关性。 0 5 000 10 000 15 000
浓度值（pg/mL）
1.3 统计学方法 图1 不同配方与信号值的对应关系
用 SPSS17.0 和 GraphPad Prism 5.0 软件进行数 Figure 1 Relation between different formulas and the sig⁃
据处理与分析；两种检测方法结果的差异分析采用 nal value
Bland⁃Altman检验，采用线性回归进行相关性分析，
表3 不同反应时间后的检测结果
检验水准（α）为0.05。
Table 3 Test results after different reaction times
（pg/mL）
2 结 果
检测时 检测结果
2.1 反应体系的建立 间（min） 第1次 第2次 第3次 平均值
2.1.1 抗体标记的最佳条件 5 294.12 300.80 293.73 296.22
实验结果显示，当pH为6.5~7.0时，残余抗体最 10 503.99 505.07 506.71 505.26
少（表2）；因此将抗体的标记pH确定为6.5~7.0。 15 514.65 519.72 504.11 512.83
0.052 3，标准差为 0.002 5，根据均值+2×标准差，代
表2 不同pH条件下抗体的标记效率
Table 2 Conjugated efficiency of antibody with different 入定标曲线方程计算得到 PlGF 检测卡的空白限为
pH condition 6.08 pg/mL。
标记条 PlGF残余抗体（μg） 2.2.2 灵敏度（检测限）

件（pH） 样本1 样本2 样本3 样本4 样本5 均值 根据实验结果，5 个低值样本的检测结果均高
5.0 15.8 13.7 12.9 15.6 15.9 14.8 于空白限（6.08 pg/mL），确定 PlGF 检测卡的灵敏度
5.5 04.9 3.9 4.7 3.6 4.4 4.3 （检出限）为10.0 pg/mL（表4）。
6.0 01.6 1.3 1.8 0.9 1.2 1.4 2.2.3 准确度（回收率）
6.5 00.2 0.1 0.2 0.2 0.4 0.2 根据实验结果，确定 PlGF 检测卡的准确度（回
7.0 00.2 0.2 0.3 0.1 0.6 0.3
收率）为97.98%（表5）。
7.5 02.9 2.8 3.5 3.9 3.3 3.3
2.2.4 线性范围
2.1.2 标记抗体与包被抗体用量 以理论浓度为x轴，以实际检测浓度为y轴，考察相
如图 1 所示，配方 2、配方 4、配方 5 符合线性范 关性。结果显示，PlGF检测卡在16.7~9 000.0 pg/mL

围的要求（即在20.0~9 000.0 pg/mL内，荧光信号值- 的线性相关系数r=0.999＞0.990，因此，确定PlGF检
浓度值的曲线接近于直线）；因此确定标记抗体的 测卡的线性范围为20.0~9 000.0 pg/mL（表6、图2）。
喷点量为3.5 μL/cm，包被抗体的用量为1.5 μg/μL。 2.2.5 重复性
2.1.3 反应时间 根据实验结果（表7），PlGF浓度在500.00 pg/mL
取质控品（500.0 pg/mL）80 μL 加入 PlGF 检测 和 5 000.0 pg/mL 时，检测卡的重复性（CV）分别为
卡，分别于5、10、15 min检测，重复3次求平均值，结 3.14%和2.98%。
果显示，检测卡在10 min时已完成反应（表3）；为确 2.2.6 干扰试验
保反应充分，确立反应时间为15 min。 交叉反应（特异性）实验结果显示，VEGF、EGF

2.2 分析性能评价 与 PlGF 检测卡的交叉反应在-2.48%~3.95%，对检
2.2.1 空白限 测结果无显著影响（表8）。
空白质控品重复测定 10 次，信号的平均值为 血红蛋白等干扰物质对检测结果的干扰率