Page 15 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第11期 许 莉，陈 娜. 孕激素对小鼠脾细胞淋球菌感染模型NLRP3炎性体表达及Th17/Treg分化的影响［J］.
2021年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（11）：1574-1578，1591 ·1577 ·

8 NLRP3 A 1 2 3 4 5
7 6 RORγt * * # NLRP3 118 kDa
mRNA相对表达量 5 4 3 * # # # # # Caspase⁃1p20 20 kDa
Foxp3

RORγt
63 kDa

1 2 Foxp3 48 kDa
β⁃actin 42 kDa
0
空白对照组 Ng组 -9 mol/L孕酮组 -8 mol/L孕酮组 -7 mol/L孕酮组 B 7 NLRP3
caspase⁃1p20
Ng+1×10 Ng+1×10 Ng+1×10 6 5 RORγt * * * # #
Foxp3
与空白对照组比较，P＜0.01；与Ng组比较，P＜0.01（n=5）。 4 # # #
#
*
图 2 细胞内 NLRP3、RORγt、Foxp3 mRNA 实时荧光定量 蛋白相对表达量 3 *
PCR结果 2 # # #
Figure 2 Real⁃time PCR results of NLRP3，RORγt and 1
Foxp3 in murine splenocytes 0
空白对照组 Ng组 -9 mol/L孕酮组 -8 mol/L孕酮组 -7 mol/L孕酮组

129.85、123.57、131.62、115.74，P均<0.01）。Ng刺激
小 鼠 脾 细 胞 后 ，细 胞 内 NLRP3、Caspase ⁃ 1p20、 Ng+1×10 Ng+1×10 Ng+1×10
RORγt、Foxp3 蛋白表达较空白对照组明显增加，分 A：细胞内NLRP3、caspase⁃1p20、RORγt、Foxp3蛋白Western blot
-9
别为空白对照组的 5.62 倍（t=10.58，P＜0.01）、5.71 结果。1：空白对照组；2：Ng组；3：Ng+1×10 mol/L孕酮组；4：Ng+1×
倍（t=11.56，P＜0.01）、5.69 倍（t=12.04，P＜0.01）和 10 mol/L 孕酮组；5：Ng+1×10 mol/L 孕酮组。B：细胞内 NLRP3、
-8
-7
2.82倍（t=8.39，P＜0.01）。加入孕酮预处理后，细胞 caspase⁃1p20、RORγt、Foxp3蛋白半定量分析结果。与空白对照组比
较，P＜0.01；与Ng组比较，P＜0.01（n=3）。
#
*
内NLRP3、caspase⁃1p20、RORγt蛋白表达水平随着孕
图 3 各组细胞内 NLRP3、caspase⁃1p20、RORγt、Foxp3 蛋
酮浓度的增高而降低，Foxp3 蛋白表达水平随着孕酮
白表达情况
-8
-7
浓度的增高而增高。加入1×10 mol/L或 1×10 mol/ Figure 3 Expression of NLRP3，caspase ⁃ 1p20，RORγt
L 孕酮能明显降低 Ng 刺激引起的脾细胞内 NL⁃ and Foxp3 proteins in murine splenocytes of
RP3、Caspase⁃1p20、RORγt 蛋 白 表 达 水 平 ，上 调 each group
Foxp3 蛋白表达水平，与 Ng 组比较，差异有统计 10.28、13.57、12.83，P均＜0.01，表1）。
学 意 义（t=13.48、12.83、10.39、14.36，P 均 <0.01，
3 讨 论
图 3）。
2.4 培养上清中 IL⁃1β和 Th17/Treg 相关细胞因子 NLRP3炎性体是由NLRP3、接头蛋白ASC和效
IL⁃17、TGF⁃β、IL⁃10含量的变化 应蛋白Caspase⁃1组成的一种分子量约为700 kDa的
ELISA结果显示，细胞培养上清中IL⁃1β、IL⁃17、 大分子蛋白复合体，在细胞质内发挥外源性微生物

TGF⁃β、IL⁃10 水平各组间差异有统计学意义（F= 或内源性危险信号感受器的作用，它能使无活性的
193.65、219.82、152.56、189.71，P 均＜0.01）。Ng 刺 Caspase⁃1前体转化为活性 Caspase⁃1，后者可裂解IL⁃
激小鼠脾细胞后，细胞培养上清中 IL⁃1β、IL⁃17、 1β、IL⁃18、IL⁃33前体以形成活性形式并分泌 。研
［4］
TGF⁃β、IL⁃10含量明显增加，与空白对照组比较，差 究发现，NLRP3 炎性体介导的 IL⁃1β的表达导致
异有统计学意义（t=14.81、15.87、12.15、13.49，P 均 Th17/Treg 失衡，诱导 T 细胞向 Th17 分化，引起局部
［6］
＜0.01）。加入孕酮预处理后，细胞培养上清中 IL⁃ 炎症反应和组织损伤 。本研究发现，Ng刺激小鼠
1β、IL⁃17水平随着孕酮浓度的增高而降低，TGF⁃β、 脾细胞后，Th17 细胞、Treg 细胞比例升高，NLRP3、
IL⁃10 水平随着孕酮浓度的增高而增高。加入 1× Th17/Treg 特异性转录因子 RORγt、Foxp3 mRNA 和
10 mol/L或1×10 mol/L孕酮能有效抑制Ng刺激引 蛋白表达明显增加，细胞上清中Th17/Treg相关细胞
-7
-8
起的脾细胞 IL⁃1β、IL⁃17 的分泌，促进 TGF⁃β、IL⁃10 因子 IL⁃17、TGF⁃β、IL⁃10 水平亦增加。这一结果表
的分泌，与 Ng 组比较，差异有统计学意义（t=11.94、 明在 Ng 感染小鼠脾细胞的体外模型中 Ng 可诱导