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第41卷第11期 许 莉，陈 娜. 孕激素对小鼠脾细胞淋球菌感染模型NLRP3炎性体表达及Th17/Treg分化的影响［J］.
2021年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（11）：1574-1578，1591 ·1575 ·

of Th17 cells，the mRNA and protein levels of NLRP3 and RORγt in the splenocytes，the protein levels of Caspase⁃1p20 and the
concentrations of IL⁃1β and IL⁃17 in the supernatant were significantly lower than those in Ng group. The proportion of Treg cells，the
mRNA and protein levels of Foxp3 in the splenocytes and the concentrations of TGF⁃β and IL⁃10 in the supernatant were significantly
higher than those in Ng group（P < 0.01）. Conclusion：Progesterone can inhibit the expression of NLRP3 and Th17 differentiation，and
promote the differentiation of Treg cells in murine splenocytes induced by Ng infection.
［Key words］ Neisseria gonorrhoeae；progesterone；NLRP3；Th17/Treg
［J Nanjing Med Univ，2021，41（11）：1574⁃1578，1591］

淋病是一种由革兰氏阴性淋球菌（Neisseria growth facfor，TGF）⁃β、IL⁃10 ELISA 试剂盒（Abcam
gonorrhoeae，Ng）感染引起的性传播疾病。50%以上 公司，美国）。
的女性Ng感染是无症状的，成为淋病防控的巨大隐 Ng ATCC 49226 标准株由中国药品生物制品
患，患者因延误就医可引起上行性感染，诱发子宫 检定所提供。菌株经 Ng 培养基培养，并制备成
［1］
内膜炎和盆腔炎 。前期实验证实女性无症状 Ng D（600 nm）值为0.15的细菌悬液。
［2］
感染与患者体内孕激素水平增高有关 ，且动物实 1.2 方法
验证实孕激素可促进小鼠阴道局部Ng感染 ，但孕 1.2.1 脾细胞体外培养及处理
［3］
激素是通过何种机制抑制机体的免疫应答并引起 雌性 BALB/c 小鼠，6~8 周龄，体重 18~20 g，购
无症状 Ng 感染有待深入研究。NLRP3 炎性体是一 自华中科技大学同济医学院实验动物中心。2%戊

类大分子蛋白质，它能活化半胱天冬酶⁃1（Caspase⁃ 巴比妥麻醉小鼠，无菌取脾脏，匀浆分离脾细胞，淋
1），并引起白细胞介素（interleukin，IL）⁃1β、IL⁃18等 巴细胞分离液分离出脾淋巴细胞，RPMI 1640 培养
促炎细胞因子的分泌，参与机体抵抗病原体免疫应 液调整浓度至 2×10 个/mL。在 24 孔板中每孔加入
6
答 ［4-5］ 。NLRP3 炎性体介导的 IL⁃1β表达导致 Th17/ 1 mL 脾淋巴细胞悬液，37 ℃、5%CO2培养 24 h 后更
Treg 失衡，诱导 T 细胞向 Th17 分化 。Th17 细胞 换培养基，细胞分为 5 组：①空白对照组（用含 10%
［6］
及其分泌的细胞因子IL⁃17在机体抵抗Ng感染免疫 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基常规培养 3 d）；②Ng
［7］
反应中发挥重要作用 。研究发现，Ng 可诱导阴 组（加入 2×10 CFU/mL Ng 悬液作用 3 d）；③Ng+1×
7
道黏膜局部产生 Treg，其与 Ng 慢性无症状感染有 10 mol/L 孕酮组（预先加入 1×10 mol/L 孕酮作用
-9
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关 。我们推测孕激素通过影响 NLRP3 炎性体的 细胞2 h，再加入2×10 CFU/mL Ng悬液作用3 d）；④
［8］
7
表达进而导致Th17/Treg失衡，从而在淋病无症状感 Ng+1×10 mol/L 孕酮组（预先加入 1×10 mol/L 孕
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染中发挥作用。本研究建立小鼠脾细胞 Ng 感染模 酮作用细胞 2 h，再加入 2×10 CFU/mL Ng 悬液作用
7
型，观察孕激素对 Ng 刺激后 NLRP3 炎性体表达及 3 d）；⑤Ng+1×10 -7 mol/L 孕 酮 组（预 先 加 入 1×
Th17/Treg 分化的影响，为孕激素在无症状 Ng 感染 10 -7 mol/L 孕酮作用细胞 2 h，再加入 2×10 CFU/mL
7
中的作用机制提供实验依据。 Ng悬液作用3 d）。实验独立重复3次。
1.2.2 流式细胞术检测Th17细胞和Treg细胞的比例
1 材料和方法
将每组脾淋巴细胞悬液分为4管，1管用于检测
1.1 材料 Th17细胞，1管用于检测Treg细胞，另2管分别为相
RPMI 1640 培养基（Gibco 公司，美国），胎牛血 应同型对照。分别加入 CD4⁃FITC、CD25⁃APC、IL⁃
清（杭州四季青生物工程公司），淋巴细胞分离液 17⁃PE、Foxp3⁃PE抗体进行染色后，应用流式细胞仪
（北京达科为生物技术有限公司），孕酮（Sigma 公 检测Th17细胞和Treg细胞的比例。

司，美国），TRIzol（Invitrogen 公司，美国），anti⁃NL⁃ 1.2.3 实时荧光定量 PCR 检测细胞中 NLRP3 和
RP3 抗体（Abcam 公司，美国），anti⁃Caspase⁃1p20 抗 Th17/Treg特异性转录因子RORγt、Foxp3mRNA的表达
体、anti⁃RORγt 单抗、anti⁃Foxp3 单抗（Santa 公司，美 用TRIzol试剂提取细胞总RNA，取1 μg用于逆
国），CD4⁃FITC、CD25⁃APC、IL⁃17⁃PE、Foxp3⁃PE抗体 转录，逆转录按照逆转录酶试剂说明操作。所用引

（Ebioscience 公司，美国），逆转录试剂盒（TOYOBO 物序列如下：NLRP3 上游：5′⁃AAGCAGCAGATG⁃
TM
公司，日本），SYBR Premix Ex Taq 试剂盒（TaKaRa GAGACTGGAAA⁃3′，下游：5′⁃TGAACAGAGCCCTG⁃
公司，日本），IL⁃17、转化生长因子（fransforming GC AGGTAG⁃3′，扩增产物为 149 bp；RORγt 上游：