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第41卷第11期
               ·1608 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年11月


              functional impact of the variant on H19 still needs further experimental validation.
             ［Key words］ renal cell carcinoma；genetic variant；H19，；susceptibility；survival
                                                                           ［J Nanjing Med Univ，2021，41（11）：1607⁃1613］





                  肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是肾癌的            族，无血缘基因联系。所有患者均经组织病理学证
              主要类型，分别占男性和女性所有恶性肿瘤的 5%                           实患 RCC，既往接受过化疗、放疗或有其他类型恶
              和 3% ［1-2］ ，其中高达 17%的患者在诊断时出现转                    性肿瘤的患者被排除在本研究之外。根据WHO标
              移，其余 30%的患者甚至在手术治疗后也会出现                           准及TNM系统进行分级，分为局部（Ⅰ期和Ⅱ期）及
              转移  ［3-4］ ，总体预后较差。肾癌的发生是一个复杂                      晚期（Ⅲ期和Ⅳ期）RCC。对照组为门诊体检患者，
                                                         ［5］
              的过程，涉及环境和遗传因素之间的相互作用 。                            并按照性别和年龄（±5岁）进行频率匹配，排除与患
              近年来，基因变异已被广泛研究并证明影响RCC的                           者有遗传关联或有癌症病史的患者。本研究设计
              易感性、进展和预后         ［6-7］ 。                         为两个阶段：实验组于2004年5月—2009年10月共
                  长链非编码RNA（long non⁃coding RNA，lncRNA）          纳入342例RCC患者和361例对照，每6个月在门诊
              是一类长度超过200个核苷酸的内源性细胞核糖核                           随访患者，终点为患者死亡或丢失访。其中 44 例
                                     ［8］
              酸，缺乏蛋白质编码能力 ，越来越多的证据表明                            （12.9%）患者缺少足够的随访信息被排除，最长随
              lncRNA 在各种癌症的发生和发展中起到至关重要                         访时间为72.0个月，中位随访时间为25.1个月。验
                    ［9］
              的作用 。lncRNAH19 是一种父系印记基因，位于                       证组至今共纳入672例RCC患者和702例对照。所
                                 ［10］
              人类染色体11p15.5上 ，通过调节miRNA功能及介                      有患者信息均通过标准问卷调查获得，获得知情同
              导DNA甲基化参与重要的生物学和病理学过程 。                           意后，捐献 5 mL 静脉血。本研究对 1 014 例 RCC 患
                                                         ［11］
              H19 与胰岛素样生长因子 2（insulin like growth fac⁃          者及 1 063 例健康对照 4 种基因多态性的多种组合
              tor 2，IGF⁃2）基因密切相关，该基因也位于受甲基化                     进行分型与分析。
              印记影响的区域，参与胎儿的正常生长和发育 ，同                           1.2  方法
                                                       ［12］
              时也在癌症的发生发展中发挥功能                  ［13］ 。研究表明       1.2.1 多态性选择
              H19异常表达与多种恶性肿瘤包括膀胱癌、乳腺癌、                               使用UCSC网站（http：//genome.ucsc.edu/）对位于
              食管癌及肾细胞癌的发生相关               ［14］ 。Wang 等 ［15］ 研究  人染色体 11p15.5（位置 20164062021693）H19 基因
              发现，H19 在 RCC 肿瘤组织中高表达，并与肿瘤分                       及其启动子中的基因多态性进行鉴定，在千人基因组
              期、淋巴结转移及远处转移有关，且 H19 表达是                          计划的东亚人群中以定位等位基因频率>0.05 为标
              RCC 患者临床预后的独立预测因子。新近研究一                           准。本研究最终选择并研究 rs2839698、rs217727、
              致表明 H19 基因多态性与各种癌症发病风险及预                          rs3741216和rs3741219 4个标记多态性。
              后相关，包括胃癌        ［16］ 、结直肠癌  ［17］ 、膀胱癌 ［18］ 和乳腺    1.2.2 DNA提取和基因分型
              癌 ［19］ 等。最近一项荟萃分析表明，H19 rs2839698与                     通过蛋白酶K消化及氯仿从外周血中提取基因
              胃肠癌风险增加有关          ［20］ 。鉴于 H19 在 RCC 发生发         组 DNA，4 种多态性基因分型使用预先设计的 Taq⁃
              展中的关键作用，其基因变异可能与RCC发病及预                           Man SNP基因分型试剂盒（Applied Biosystems 公司，
              后相关。然而目前并没有研究探讨此类问题，因此                            美国）进行分析，每个单核苷酸多态性的引物和探
              本 研 究 选 择 H19 最 被 广 泛 研 究 的 4 个 多 态 性 ：           针 序 列 可 根 据 要 求 提 供（表 1）。 在 384 孔 ABI
              rs2839698、rs217727、rs3741216 和 rs3741219，并在       7900HT实时聚合酶链反应系统中进行扩增和分析，
              一项两阶段病例对照研究中评估其与 RCC 风险及                          使用SDS 2.3软件进行等位基因鉴别。每个平板内均
              预后的关系。                                            包括质控品，以确保基因分型的准确性。随机选择约
                                                                10%的样本进行重复基因分型，结果100%一致。
              1  对象和方法
                                                                1.3  统计学方法
              1.1  对象                                                基因突变的等位基因频率在分析前使用拟合
                  本研究始于2004年5月，得到南京医科大学第                        优度χ 检验检测是否偏离 Hardy⁃Weinberg 平衡，采
                                                                      2
              一附属医院伦理委员会批准。所有入组者均为汉                             用Student’s t检验（连续变量）和χ 检验（分类变量）
                                                                                               2
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