Page 75 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第12期 高 波，晁红颖，韩文敏，等. 核型正常髓系肿瘤患者的基因突变研究［J］.
2021年12月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（12）：1780-1785，1805 ·1781 ·

（15.0%）mutations. ③The incidence of mutation was similar in AML patients and MDS patients（P=0.097）. The mutation rate of each
of NPM1 and CEBPA double mutations was higher in patients with AML（P < 0.05），while RUNX1，ASXL，SF3B1 and BCOR
mutations were identified more frequently in MDS patients，both differences were significant（P < 0.05）. ④Gene aberrations involved
in DNA methylation（DNMT3A，TET2，IDH1/2）and receptors/kinases（FLT3⁃ITD，FLT3⁃TKD，JAK1，JAK2，JAK3，c⁃KIT，PDGFRA，
PDGFRB，MPL，CSF3R，NOTCH1，IL7R）significantly predominated in AML while post⁃translational chromatin modification（EZH2，
ASXL1/2，SETD2）and RNA splicing（SRSF2，SF3B1，ZRSR2，U2AF1）significantly predominated in MDS（P < 0.05）. Conclusion：

Different functional mutation combinations revealed multiple sub ⁃ clones in myeloid malignancies with normal karyotype. The
genomic landscape of AML patients was different from MDS patients.
［Key words］acute myeloid leukemia；myelodysplastic syndrome；gene mutation
［J Nanjing Med Univ，2021，41（12）：1780⁃1785，1805］

急性髓系白血病（acute myelogenous leukemia， （morphology immunology cytogenetics molecular，

AML）和骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syn⁃ MICM）确诊，其中MDS分型依据WHO⁃2016标准。本
drome，MDS）是一类临床和分子遗传学异质性很强 研究经医院伦理委员会批准，所有受试者知情同意。
的造血干细胞克隆性恶性疾病。尽管细胞遗传学 1.2 方法
改变已成为 AML 及 MDS 患者重要的致病机制及独 1.2.1 基因组DNA的提取
立预后指标之一，但仍有部分正常核型患者预后差 取患者首诊时乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝的骨
异较大，致病机制不明。随着分子学研究的进展， 髓或者外周血单个核细胞，按照 DNA 提取试剂盒
近年来，国外学者在正常核型患者中检测到多个基 （Gentra 公司，美国）标准步骤抽取基因组 DNA。根
因异常，推测单一的分子事件不足以导致细胞恶性 据吸光度值确定DNA浓度和纯度，并将基因组DNA
转化，肿瘤细胞的形成需要2次或多次基因事件协同 样品统一稀释至50 ng/μL。
完成 ［1-2］ 。因此，对此类患者进行多基因多位点检测 1.2.2 高通量DNA测序
有助于进一步精确诊断，为实现个体化治疗及靶向治 取所检样品基因组 DNA 12 ng，通过多重 PCR
疗提供新的理论依据。本研究在前期研究基础上，综 扩增基因组DNA的目标区域，并将PCR产物进行酶
合检测了102例正常核型髓系肿瘤患者51种肿瘤相 切反应，消化引物；参考 IonAmpliSeq 文库试剂盒操
关基因突变，初步探讨正常核型患者的分子学特点。 作的标准流程，将 Am⁃Pure XP 磁珠与 PCR 产物结
合，纯化文库，去除小的片段，在避光条件下检测文
1 对象和方法
库浓度。采用 Termofisher 科技（中国）有限公司 S5
1.1 对象 系统进行 49 种基因的所有外显子突变。平均基因
回顾性检测2013年6月—2017年8月于南京医 覆盖率>99%，平均测序深度×2 000，检测灵敏度约
科大学附属常州第二人民医院及苏州大学附属第 3.0%。采用IGV 软件分析结果，读取数据选择基因
一医院门诊及住院治疗的正常核型的原发 AML 及 组外显子上的突变，突变频率>3%被认为阳性，同时
MDS 患者共 102 例。82 例 AML 患者中，男 48 例，女 去除基因多态性及同义突变。49 种髓系相关肿瘤
34例，中位年龄45（17~68）岁，包括M0 2例，M17例， 基 因 突 变 包 括 PTPN11、BCOR、NRAS、WT1、
M2 28 例，M4 7 例，M5 35 例，M6 1 例，未能分型 AML MYD88、C⁃KIT、TET2、IDH1、IDH2、FLT3、DNMT3A、
2 例。20例MDS患者中，男11例，女9例，中位年龄 CBL、ZRSR2、BCORL1、U2AF1、GATA2、ETV6、
49（29~70）岁，包括难治性贫血伴有环形铁粒幼细 SH2B3、MPL、CSF3R、SETBP1、ASXL1、ASXL2、
胞 增 多（refractory anemia with ring sideroblast， ETNK1、SETD2、PDGFRA、CALR、PDGFRB、CSMD1、
RARS）1 例，难治性血细胞减少伴有多系发育异常 RUNX1、SRSF2、TP53、NOTCH1、JAK1、JAK2、JAK3、
（refractory cytopenia with multilineage dysplasia， IL7R、PAX5、EZH2、STAG2、PIGA、PHF6、BIRC3、
RCMD）2 例 ，难 治 性 贫 血 伴 原 始 细 胞 增 多 1 型 KRAS、SF3B1、CDKN2A、PTEN、BRAF 及 FBXW7 基
（refractory anemia with excess of blasts⁃1，RAEB⁃1） 因突变。
7 例，RAEB⁃2 型10例。所有患者均经骨髓形态学、 1.2.3 Sanger测序
白血病免疫分型、染色体核型及分子生物学检查 鉴于第 2 代高通量 DNA 测序技术对大片段插