Page 13 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第2期 郭苗苗，刘龙飞，谢梦晓，等. GCN5调控sublytic C5b⁃9诱导大鼠肾小球系膜细胞表达Cyclin D1
2021年2月 及致SOX9的乙酰化修饰［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（02）：160-165 ·163 ·

A 上调 Cyclin D1 的启动子活性，而沉默 GCN5 基因后
Thy⁃1N Ab+C6DS
由 sublytic C5b⁃9 上调的 Cyclin D1 启动子活性显著
sublytic C5b⁃9
MEM Thy⁃1N Ab Thy⁃1N Ab+HIS Thy⁃1N Ab+C6DS+C6 下降（P＜0.05或P＜0.01，图3）。
GCN5 —92 kDa
5
SOX9 —56 kDa 4 **
Cyclin D1 RLU值
Cyclin D1 —37 kDa 3

β⁃actin —42 kDa 2 # △
B 1
6
GCN5 * 0
蛋白相对表达水平 4 2 Cyclin D1 ** ** ** ** * 与pIRES2比较，P < 0.01；与 shCTR比较，P < 0.05；与shCTR+
SOX9
shCTR
pIRES2
shGCN5
pIRES2/GCN5
shCTR
sublytic C5b⁃9（3 h）
#
**
Δ
图 3
过表达或沉默 GCN5 对 GMC 中 Cyclin D1 基因启动
0 sublytic C5b⁃9比较，P < 0.05（n=3）。
Thy⁃1N Ab+C6DS+C6
Thy⁃1N Ab+HIS
MEM Thy⁃1N Ab Thy⁃1N Ab+C6DS sublytic C5b⁃9 Figure 3 Effects of GCN5 overexpression or knockdown
子活性的影响
A：Western blot电泳条带；B：半定量统计分析图。与MEM、Thy⁃1 on the activity of Cyclin D1 promoter in GMC
Ab、Thy⁃1 Ab+HIS和Thy⁃1 Ab+C6DS比较，P < 0.05，P < 0.01（n=3）。 GMC 处理后提取总 RNA 和蛋白，real⁃time PCR
**
*
图2 不同处理3 h的GMC中GCN5、SOX9和Cyclin D1蛋 和 Western blot 检测显示，过表达 GCN5 可显著增加
白的表达 Cyclin D1 的 mRNA 和蛋白水平，而沉默 GCN5 基因
Figure 2 GCN5，SOX9 and Cyclin D1 protein expression
at 3 h in the GMC by different treatment 则可抑制 sublytic C5b⁃9 诱导的 Cyclin D1 表达（P <
0.05或P < 0.01，图4）。
2.3 过表达或沉默GCN5对Cyclin D1基因启动、转 2.4 Sublytic C5b⁃9 刺激大鼠 GMC 后 SOX9 乙酰化
录和表达的影响 的修饰
将 pGL3⁃Cyclin D1 启动子质粒分别与 pIRES2/ 实验证实，sublytic C5b⁃9和Thy⁃1 Ab+C6DS+C6
GCN5 或 shGCN5 共 转 染 GMC。 在 转 染 后 48 h， 组，SOX9 的乙酰化水平显著增加，且 SOX9 的蛋白
pIRES2/GCN5 组不予刺激，而转染 shGCN5 质粒的 表达也明显升高（图5）。
GMC 培养 36 h，用无血清饥饿 12 h，再给予 sublytic 过表达GCN5基因对SOX9乙酰化修饰的影响：
C5b⁃9 刺激 3 h。结果显示，过表达 GCN5 基因明显 为了证明 GCN5 可对 SOX9 进行乙酰化修饰，将

A 5 4 ** B pIRES2 pIRES2/GCN5 C 4 GCN5 #
Cyclin D1 RLU值 3 2 ## △△ Cyclin D1 -92 kDa 蛋白相对表达水平 3 2 * * #
Cyclin D1
GCN5
-37 kDa

0 1 β⁃actin -42 kDa 1 0 △ △△
pIRES2
pIRES2/GCN5 shCTR shCTR shGCN5 shCTR shCTR shGCN5 pIRES2 shCTR shCTR shGCN5
sublytic C5b⁃9
pIRES2/GCN5
sublytic C5b⁃9（3 h）
GCN5 -92 kDa sublytic C5b⁃9（3 h）
Cyclin D1 -37 kDa
β⁃actin -42 kDa
与pIRES2比较，P < 0.05，P < 0.01；与shCTR比较，P < 0.05，P < 0.01；与shCTR+sublytic C5b⁃9比较，P < 0.05， P < 0.01（n=3）。
ΔΔ
Δ
**
*
##
#
图4 过表达或沉默GCN5基因影响Cyclin D1 mRNA（A）和蛋白（B）表达
Figure 4 Effects of GCN5 overexpression or knockdown on the expression of Cyclin D1 mRNA（A）and protein（B）