Page 14 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第2期
·164 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年2月

pIRES2、Flag⁃GCN5 过表达质粒及ΔGCN5 分别与 IP：SOX9 IP：IgG
HA⁃SOX9 过表达质粒共转染 GMC 48 h，行 Co⁃IP/
Western blot 检测证实，过表达GCN5可增强SOX9的
乙酰化，而过表达ΔGCN5则对SOX9乙酰化水平无明 shCTR+sublytic C5 shCTR+sublytic C5b sublytic C5b⁃9
显影响（图6）。 shCTR
沉默 GCN5 基因对 sublytic C5b⁃9 诱导 SOX9 乙
56 kDa IP：SOX9 IB：Ack
酰化修饰的影响：为了进一步明确 GCN5 能乙酰化
修饰SOX9，将shGCN5及对照质粒分别转染GMC再 56 kDa IP/IB：SOX9
行sublytic C5b⁃9刺激3 h，用Co⁃IP/Western blot实验 92 kDa IB：GCN5

发现，沉默GCN5基因后确能明显降低sublytic C5b⁃
56 kDa IB：SOX9 WCL
9诱导SOX9的乙酰化修饰（图7）。
42 kDa IB：β⁃actin
IP：SOX9 IP：IgG 图 7 沉默 GCN5 基因后影响 sublytic C5b⁃9 诱导 SOX9 乙
酰化的修饰
Figure 7
Effects of GCN5 gene silencing on SOX9 acetyla⁃
tion induced by sublytic C5b⁃9

［2］
MEM Thy⁃1N Ab Thy⁃1N Ab+HIS Thy⁃1N Ab+C6DS Thy⁃1N Ab+C6DS+C6 sublytic C5b⁃9 究 MsPGN 公认的动物模型 。以往实验已表明，
Thy⁃1N的发病具有sublytic C5b⁃9的依赖性，即当其
56 kDa IP：SOX9 IB：Ack
GMC膜表面形成sublytic C5b⁃9后，它可作为细胞的
56 kDa IP/IB：SOX9 刺激原激活某些信号通路及上调多种转录因子和转
录辅激活因子，进而促使相应基因的转录与表达，最
56 kDa IB：SOX9
终引起GMC的凋亡、炎症或增生反应 ［3-4，9］ 。
42 kDa IB：β⁃actin 就Thy⁃1N大鼠GMC的增生而言，不仅需要sub⁃
图5 不同分组处理的GMC中SOX9乙酰化水平 lytic C5b⁃9的插膜刺激，也需要转录因子、转录辅激
Figure 5 SOX9 acetylation level in the GMC with various 活因子和促增生基因的共同参与 ［10-12］ 。本课题前期
treatment 实验已确证，无论是 Thy⁃1N 大鼠发病 3 h 的肾组织

（体内），还是在受 sublytic C5b⁃9 刺激 3 h 的 GMC 中
pIRES2 + - +
Flag⁃GCN5 - + - （体外），GCN5、SOX9 和 Cyclin D1 的表达均明显上
ΔGCN5 - - +
HA⁃SOX9 + + + 调。此外，本课题组还发现，Cyclin D1 表达的高峰
时相稍晚于GCN5和SOX9，且GCN5与SOX9的表达
56 kDa IP：HA IB：Ack
峰值基本同步，加之 SOX9 的上调能促进 Cyclin D1
56 kDa IP/IB：HA
基因转录，故这些结果提示，GCN5、SOX9 和 Cyclin
D1之间可能存在着密切的关系。
92 kDa IP/IB：Flag
由于本课题组过去的实验已发现，SOX9 对
42 kDa IB：β⁃actin Cyclin D1的表达有调控效应（待发表）。因此，本研
究着重探讨了在 GMC 中过表达或沉默 GCN5 对
图6 过表达GCN5或ΔGCN5影响SOX9乙酰化修饰的作用
Figure 6 Effects of GCN5 or ΔGCN5 overexpression on Cyclin D1 基因激活的影响。结果发现，过表达
SOX9 acetylation GCN5 能提高 Cyclin D1 的启动子活性、mRNA 和蛋

白水平，而沉默GCN5基因则能降低由 sublytic C5b⁃
3 讨 论
9 刺激导致的Cyclin D1 基因的启动与表达。提示，
人类 MsPGN 发病率约占临床肾病综合征的 GCN5确能促进Cyclin D1基因的表达。
30%，其组织病变的主要特征是，GMC 的过度增生 文献报道，GCN5 作为一个兼有 HAT 活性的转
和 ECM 的大量积聚，最终可致肾小球纤维化，引起 录辅激活因子，其表达升高时既能乙酰化修饰组蛋
［1］
患者肾功能衰竭而死亡 。大鼠 Thy⁃1N 是当今研 白，又能乙酰化修饰非组蛋白（如转录因子），以增强