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第41卷第2期           周  顺，王 勇，张 峰，等. 巨噬细胞中神经损伤诱导蛋白1在肝脏缺血再灌注损伤及
                  2021年2月           其炎症反应中的作用［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（02）：166-172                   ·169 ·


                高压注射入小鼠体内，以达到体内特异性干扰巨噬                            比，肝门阻断组患者术后第1天AST有增高趋势，但
                细胞的目的。                                            两组患者术前、术后AST的差异无统计学意义。
                1.2.9 酶联免疫吸附实验ELISA                                   RT⁃PCR结果显示，肝门阻断组患者术后PBMC
                    取细胞培养上清，上清中细胞因子IL⁃6、TNF⁃α、                    中Ninj1的基因表达水平较术前明显上调（P < 0.05，
                IL⁃1β采用美国 eBioscience 公司的 ELISA 试剂盒检              图 1B）。免疫印迹实验也证实，肝门阻断组患者术
                测，实验步骤遵照说明书进行。                                    后 PBMC 中 Ninj1 的蛋白表达水平与术前相比明显
                1.3  统计学方法                                        增高（P < 0.05），而对照组患者 PBMC 中 Ninj1 的表
                    采用 SPSS 19.0 软件进行统计学分析。计量资                    达无明显变化（图 1C），提示外周单核细胞中 Ninj1
                料以均数±标准差（x ± s）表示，采用单因素方差分析                       参与肝脏IR损伤的过程。
                进行比较，组间比较采用 LSD⁃t 检验。P < 0.05为差                   2.2  体外干扰 Ninj1 的表达对 LPS 诱导的小鼠 BM⁃
                异有统计学意义。                                          DM炎性反应的影响
                                                                      体外LPS刺激小鼠BMDM后，Ninj1的蛋白表达
                2  结 果
                                                                  水平较 PBS 组明显增高（图 2A）。RT⁃PCR 和 ELISA
                2.1  肝部分切除术患者术前、术后肝功能以及                           的结果均证实LPS刺激能诱导BMDM分泌大量炎症
                PBMC中Ninj1表达水平的比较                                 因子（IL⁃6、TNF⁃α、IL⁃1β）（图 2B）。而与 LPS 组相
                    两组患者的肝功能如图 1A 所示，与对照组相                        比，Ninj1⁃siRNA+LPS 组的 BMDM 分泌的炎症因子

                A   500                        B   30                  术前   C              肝门阻断组
                         肝门阻断组                            *            术后            标本1     标本2    标本3
                         对照组
                   （ U/L ） 400                     20                          Ninj1  术前 术后 术前 术后 术前 术后    -17 kDa
                    300
                   AST  200                       Ninj1/GAPDH  10
                    100                                                      GAPDH                         -37 kDa
                     0                             0                                        对照组
                         术前   术后第1天 术后第3天              肝门阻断组       对照组               标本1     标本2    标本3
                                                                                   术前 术后 术前 术后 术前 术后
                                                                               Ninj1                       -17 kDa
                                                                             GAPDH                         -37 kDa

                   A：肝门阻断组和对照组患者术前、术后第1天、术后第3天血清AST变化情况（n=6）；B：RT⁃PCR检测肝门阻断组和对照组患者术前、术后
                PBMC中Ninj1的mRNA表达情况（P < 0.05，n=6）；C：Western blot检测肝门阻断组和对照组患者术前、术后PBMC中Ninj1的蛋白表达情况。
                                       *
                                   图1 肝门阻断组与对照组患者术前、术后AST以及PBMC中Ninj1的比较
                Figure 1  Comparison of AST and of Ninj1 in PBMC of pre⁃operation and post⁃operation between the hepatic portal occlu⁃
                        sion group and control group

                明显减少（P < 0.05）。                                   显增多，肝组织中炎性因子的 mRNA 水平显著升

                2.3  体内特异性干扰巨噬细胞Ninj1的表达对肝脏                       高，血清中炎性因子的分泌显著增多（图 4）。而与
                IR损伤的作用                                           IR组相比，Ninj1⁃siRNA+IR 组中上述炎性指标均明
                    IR 后小鼠血清 ALT 和 AST 的水平较 Sham 组明               显下降（P < 0.05）。
                显增高（图3A、B）。HE染色显示，IR组肝脏组织结
                                                                  3  讨 论
                构的损伤明显（图3C）。与IR组相比，Ninj1⁃siRNA+
                IR 组HE 染色和Suzuki’s评分均提示肝脏组织的损                         肝脏IR损伤的发生机制非常复杂，巨噬细胞介
                伤明显减轻（图3C、D），并且ALT和AST水平显著降                       导的先天免疫在其中发挥了至关重要的作用。在
                低（P < 0.05，图3A、B）。                                肝脏的缺血期，肝实质细胞由于缺血缺氧直接受

                2.4  体内特异性干扰巨噬细胞 Ninj1 对 IR 后炎症                   损，释放出损伤相关分子模式（damage⁃associated
                反应的影响                                             molecular pattern，DAMP）激活肝枯否细胞（Kupffer
                    与 Sham 组相比，肝脏 IR 后体内炎症反应明显                    cells，KC）启动肝内炎症反应；在肝脏的再灌注期，
                激活，表现为IR组肝脏内CD11b 巨噬细胞的数量明                        激活的 KC 释放出大量的炎性因子和趋化因子，趋
                                            +
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