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第41卷第2期
               ·174 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年2月


                  质子泵抑制剂（如兰索拉唑）是一种强效胃酸                               兰索拉唑标准品购于中国食品药品检定研究
              抑制剂，前药形式的质子泵抑制剂因其良好的脂溶                            院（纯度：99.6%）；DMEM 培养基（Gibco 公司，美
              性可以经简单扩散自由通过细胞膜，进入胃壁细胞                            国），胎牛血清（Biological Industries 公司，以色列）；
              后在酸性环境中发生质子化，转变为次磺酰胺类活                            Trypsin⁃EDTA 消化液（Gibco 公司，美国）；FK506
              性形式，不可逆地抑制 H /K ⁃ATPase 的功能，阻止                    （APExBIO 公司，美国）；DMSO（Sigma 公司，美国）；
                                        +
                                     +
              H 进入胃腔。因而对各种原因引起的胃酸分泌增                            GAPDH 抗体、IL⁃6 抗体、HRP 标记山羊抗兔 IgG、
                +
              加都有良好的抑制作用，是临床治疗消化性溃疡、                            FITC标记驴抗兔IgG、抗荧光淬灭封片剂（武汉塞维
              胃食管反流病等酸相关性疾病的一线药物 。然                             尔生物科技有限公司）；NFAT抗体、CaN抗体、ICAM
                                                      ［1］
              而，随着此类药物临床应用越发广泛，其潜在的不                            ⁃1抗体、VCAM⁃1抗体、Lamin B1抗体（Abcam 公司，
              良反应也逐渐显现。有研究指出，长期使用质子泵                            英国）；PMSF、RIPA裂解液、核蛋白浆蛋白提取试剂
              抑制剂可能增加骨质疏松等疾病的发生风险 ，还                            盒（上海碧云天生物技术有限公司）；PVDF 膜（Mer⁃
                                                       ［2］
              可能增加住院患者的病死率 。近年来，国内外学                            ck 公司，美国）；化学发光液（Millipore 公司，美国）；
                                        ［3］
              者逐渐关注质子泵抑制剂潜在的心血管风险。有                             逆转录试剂盒（TaKaRa公司，日本），内参引物GAP⁃
              研究指出，质子泵抑制剂会通过抑制CYP2C19酶的                         DH，其余引物由生工生物工程有限公司合成，引物
              活性而影响氯吡格雷的活化，从而增加此类用药人                            序列信息见表1。
                             ［4］
              群的心血管风险 。然而，也有研究报道，质子泵抑
              制剂的心血管风险可能与药物相互作用无关，因为                                         表1  qRT⁃PCR的引物序列
                                                                     Table 1 Primer sequences used for qRT⁃PCR
              在没有使用氯吡格雷的正常人群中，长时间使用质
                                                                   引物名称                  引物序列（5′→3′）
              子泵抑制剂也会增加心血管事件的发生风险 。
                                                         ［5］
                                                                   IL⁃6⁃F          CACTGGTCTTTTGGAGTTTGAG
              Yepuri 等 研究结果表明，长期使用质子泵抑制剂
                      ［6］
                                                                   IL⁃6⁃R          GGACTTTTGTACTCATCTGCAC
              会通过抑制溶酶体酸化而加速内皮细胞衰老，而
                                                                   ICAM⁃1⁃F        TGCAAGAAGATAGCCAACCAAT
              Ghebremariam 等 的研究证实，质子泵抑制剂可以                        ICAM⁃1⁃R        GTACACGGTGAGGAAGGTTTTA
                            ［7］
              显著增加内皮和血清中不对称二甲基精氨酸的含                                VCAM⁃1⁃F        CAGGCTGGAGATAGACTTACTG
              量，从而减弱一氧化氮合酶的血管保护作用。这些                               VCAM⁃1⁃R        CCTCAATGACAGGAGTAAAGGT
              结果表明，质子泵抑制剂可能直接作用于血管内皮
              而影响其正常功能。有研究报道，质子泵抑制剂会                                 CO2培养箱 HF100（上海力申科学仪器有限公
              增加细胞内游离钙离子浓度 ，而胞内钙离子稳态                            司）；涡旋震荡仪（Eppendorf 公司，德国）；离心机
                                        ［8］
              长期失衡可能活化钙调神经磷酸酶（calcineurin，                      （Eppendorf 公 司 ，德 国）；倒 置 荧 光 显 微 镜 IX73
              CaN）并进一步诱导活化 T 细胞核因子（nuclear fac⁃                 （Olympus 公司，日本），荧光显微镜 LSM 5（德国
              tor of activated T cell，NFAT）向细胞核内转移，引起           Zeiss 公司）；电泳仪 PowerPac      TM  BASIC（Bio⁃Rad 公
              组织功能障碍。另有研究报道，CaN 活化与血管内                          司，美国）；酶标仪（Bio Tek公司，美国）；实时荧光定
              皮中白介素6（interleukin 6，IL⁃6）、细胞间黏附分子⁃               量 PCR 仪（Applied Biosystems 公司，美国）；超声破
              1（intercellular adhesion molecule⁃1，ICAM⁃1）和血管    碎仪（Sonics 公司，美国）；化学发光图像分析系统
              细胞黏附分子⁃1（vascular cell adhesion molecule⁃1，       Tanon 5200 Multi（上海天能科技有限公司）；MilliQ
              VCAM⁃1）表达增加密切相关，这也是一部分血管毒                         超纯水机（Millipore公司，美国）。
              性物质发挥作用的重要途径 。因此，本研究以内皮                           1.2  方法
                                       ［9］
              细胞中CaN为基础，探究质子泵抑制剂增加心血管风                          1.2.1 细胞培养及分组
              险的可能机制，为临床安全用药提供一定参考。                                  HUVEC细胞贴壁生长，正常培养阶段使用含有
                                                                1%双抗和10%胎牛血清的DMEM培养基进行培养，
              1  材料和方法
                                                                隔天换液。细胞给药阶段用含有0.1% DMSO、1%双
              1.1  材料                                           抗和 10%胎牛血清的培养基或相应的含药培养基
                  人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endo⁃           进行培养，每天换液。细胞于37 ℃、含有5% CO2的
              thelial cell，HUVEC）购自生工生物工程（上海）股份                 培养箱中培养，当细胞生长至 80%汇合时进行传
              有限公司。                                             代，传代比例为1∶2，取状态良好的对数生长期细胞
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