Page 30 - 南京医科大学学报自然科学版

第40卷第6期41卷第3期
第
2021
·336 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2020年6月年3月

M 1 2 3 4 5 M 包含 CHD4 启动子区的 NF⁃κB 结合位点区域。因
5 000 bp 此，在 Jurkat 细胞中，转录因子 NF⁃κB 能与人 CHD4
3 000 bp
2 000 bp 基因启动子结合（图7）。
1 000 bp 2.8 NF⁃κB对人CHD4基因的启动子活性具有正向
750 bp
500 bp 调控作用
首先用siRNA⁃NF⁃κB和pcDNA3⁃NF⁃κB分别转
250 bp
100 bp 染 Jurkat 细胞，分析其转染效率。用结合位点突变
质粒、siRNA⁃NF⁃κB 和 pcDNA3⁃NF⁃κB 分别瞬时转
M：5000 DNA 标 准 参 照 物 ；1：P1（pGL⁃1974/+117）；2：P2
（pGL⁃918/+117）；3：P3（pGL⁃428/+117）；4：P4（pGL⁃233/+117）；5：P5 染Jurkat细胞。检测其荧光素酶活性，发现抑制NF⁃
（pGL⁃13/+117）。 κB 后，CHD4 基因的启动子活性下降；反之，当过表
图4 人CHD4基因候选启动子区5′侧翼区截短序列质粒双
达 NF⁃κB 时，CHD4 基因的启动子活性明显增加。
酶切鉴定 同时，与野生型相比，转染含有转录因子结合位点
Figure 4 Identification of the 5′ flanking region of the
candidate promoter region of human CHD4 突变序列的质粒后，CHD4 基因启动子活性明显下
gene in luciferase report gene recombinant 降，这些结果说明人类CHD4基因启动子活性受NF⁃
plasmid by double enzyme digestion κB的正向调控（图8）。

A B HEK293T C Jurkat
+117 Luciferase 400 400
-1 974 * * * * *
Luc P1（pGL-1 974/+117） 300 * 300
-918 相对荧光素酶活性 200 * *
Luc P2（pGL-918/+117） 相对荧光素酶活性 200
-428 100 100
Luc P3（pGL-428/+117）
-233 0 0
Luc P4（pGL-233/+117）
pGL⁃428/+117
pGL⁃918/+117
pGL⁃13/+117
pGL⁃428/+117
pGL⁃918/+117
pGL⁃13/+117
-13
Luc P5（pGL-13/+117） pGL⁃1947/+117 pGL⁃233/+117 pGL⁃3Basic pGL⁃1947/+117 pGL⁃233/+117 pGL⁃3Basic
Luc P6（pGL⁃3Basic）
A：启动子5′侧翼区不同长度截短序列质粒，数字代表相对转录起始点的位置；B、C：HEK293T（B）和Jurakt细胞（C）中CHD4启动子不同长
度截短序列质粒的荧光素酶相对活性。与对照组比较，P＜0.001（n=4）。
*
图5 人CHD4基因候选启动子区活性检测
Figure 5 Relative luciferase activities of candidate plasmids of CHD4 promote
-233 bp to TSS E2F1 MZF1 EVX6
TGGGCGGTTGCCCAGGTGACGCGCGCGCGCCCGCTGCGAAGGGGGCGTGGCCAGTGGTTGC
启动子 CTGAGCGACGAGGGGGCGGGGGTTGCCCGGGAGACCTGGGGAGGAGGGTGGCGGTAGTGGA
AGGGGGGGGTTGGAGTTGGTTGAGGTTATTATGGGCTGTCCGTGGGGGGGCGGGGCCTGTGC
GGTGGGATTTCCCGGCCGGTGTTTCAGGCCCTTTAAGAGGCGACGCTGG TSS
NF⁃κB EVX2
阴影表示不同转录因子结合位点，TSS表示转录起始位置。
图6 人CHD4基因启动子核心区域转录因子结合位点
Figure 6 Putative consensus binding sites of transcription factors in CHD4 promote

进展，包括肿瘤发生、病毒感染、神经退行性变等，
3 讨 论
但其在这些疾病中的作用尚未完全了解 ［5，9］ 。在某
T⁃ALL的发生和发展是一个多基因突变的多阶 些情况下，它通过对抗染色质重构来对抗转录活性
段过程，其中最显著的变化之一是对细胞凋亡的抑 因子 ［6，10］ 。在某些条件下CHD4可以促进转录，与促
制。虽然已经在诱导白血病细胞分化和促进其凋亡 癌功能相关 ［11］ 。鉴于这些调节转录活性的特点，我
［8］
方面做了很多努力，但是治愈率并没有显著提高 。 们猜测CHD4可能与T⁃ALL细胞凋亡有关。
CHD4是NuRD的核心亚基，参与许多疾病的发展和 CCK⁃8 检测、流式细胞计数检测发现 CHD4 可