Page 29 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第3期 杨彩霞，陆 超. CHD4基因表达对急性T淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响及其启动子鉴定［J］.
2021年3月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（03）：331-338 ·335 ·

A 1.5 B CHD4 260 kDa
siRNA⁃CHD4组 对照组
CHD4 mRNA相对表达量 1.0 *** GAPDH 37 kDa

0.5

0
对照组 siRNA⁃CHD4组
C siRNA⁃CHD4组 对照组 D
100
10 5 10 5 80 ***
（ % ）
7⁃AAD 3 3 UL UR 凋亡率 60
4
4
10
10
40
10
10
UR
UL
LL LR
LL 20
10 2 LR 10 2
0
对照组 siRNA⁃CHD4组
2
5
4
4
5
3
3
2
10 10 10 10 10 10 10 10
APC⁃A
E siRNA⁃CHD4组 对照组 F G2⁃M G 5 对照组
100 Aggregated 100 Aggregated S 4 siRNA⁃CHD4组 *
G1 G1 G0⁃G1 nm ）
80 G2 80 G2 （ % ） 100
细胞个数 60 S 60 S 60 （ 450 3 2 1
D
40
40
40
20 20 细胞周期分布 80 0
3
0 0 20 1 2 时间（d） 4
0 50 100 150 200 0 50 100 150 200 0
siRNA⁃CHD4组 对照组
DNA量
A、B：用qRT⁃PCR（A）和Western blot（B）检测CHD4基因在转染siRNA⁃CHD4的Jurkat细胞中的表达；C、D：抑制CHD4基因表达对Jurkat细
胞凋亡的影响（C：流式检测结果；D：定量分析结果）；E、F：抑制CHD4基因表达对Jurkat细胞周期的影响（E：流式检测结果；F：定量分析结果）；
G：通过CCK⁃8检测转染siRNA⁃CHD4的Jurkat细胞增殖受到抑制。与对照组比较，P＜0.05，P＜0.01， P＜0.001（n=3）。
*
**
***
图1 人CHD4基因促进Jurkat细胞的增殖及抑制其凋亡
Figure 1 CHD4 induces proliferation and inhibits apoptosis in Jurkat cells
Promoter predictions for 1 eukaryotic sequence with score cutoff
0.88（transcription start shown in largcr font）：
Promoter predictions
Start End Score Promoter Sequence
1 348 1 398 0.94 TATTATGGGATATCAAACTGGGGGTGGATGAAGGATGGTTATTATGGGAT
1 621 1 671 0.89 GGCATATGTGTATGAAATGTGGGGGGGCAGGGTGTGTGTGTGTTGTGTGT
1 955 2 005 0.97 TGTTTCAGGCCCTTTAAGAGGCGACGCTGGAGCCGGAGCCATTTTCCCCC
图2 生物信息学分析人CHD4基因候选启动子区域
Figure 2 Analysis of candidate promoter region of human CHD4 gene
1 M 翼区的-233 bp至-13 bp（图5）。
2.6 人 CHD4 基因启动子核心区域转录因子结合
2 000 bp
2 091 bp
位点预测
使 用 JASPAR（jaspar.genereg.net/）数 据 库 5.0
版，发现在-233~-13 bp之间存在NF⁃κB、MZF1等转
录因子结合位点（图6）。
2.7 转录因子NF⁃κB结合到CHD4基因启动子区
1：人 CHD4 基因候选启动子区扩增产物；M：2000 DNA 标准参
照物。 为进一步确定转录因子 NF⁃κB 与 CHD4 启动
图3 人CHD4基因候选启动子区扩增 子区是否可以结合，进行了染色质免疫沉淀实验
Figure 3 Amplification of the candidate promoter region （CHIP），根据启动子区的 NF⁃κB 结合位点，设计了
of human CHD4 gene 相应的引物。PCR 证实 NF⁃κB 结合的基因组 DNA