Page 25 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第3期 南京医科大学学报（自然科学版）
2021年3月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·331 ·

·基础研究·

CHD4基因表达对急性T淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影

响及其启动子鉴定

杨彩霞，陆 超 *
南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029

［摘 要］ 目的：探讨人染色质解旋酶DNA结合蛋白4（recombinant chromodomain helicase DNA binding protein 4，CHD4）基因
表达对急性T细胞淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响及其启动子鉴定。方法：使用siRNA⁃CHD4瞬时转染T淋巴细胞白
血病细胞（Jurkat）敲低CHD4基因表达，实时荧光定量qRT⁃PCR和Western blot检测细胞转染后CHD4表达量，流式细胞术测定
细胞凋亡率及细胞周期变化；CCK⁃8分析测定CHD4基因对Jurkat细胞增殖的影响。根据生物信息学分析，以Jurkat细胞提取
的全基因组DNA为模板，PCR扩增CHD4基因候选启动子区2 091 bp片段，以pGL3⁃Basic为载体，克隆含有CHD4基因候选启
动子区的序列，制备重组质粒，并且构建一系列含CHD4基因候选启动子5′侧翼区截短序列质粒。将含CHD4启动子序列的质
粒及截短序列质粒转染至 Jurkat 细胞和人胚胎肾 T 细胞（HEK293T），双荧光素酶报告基因检测各片段的启动子活性，确定
CHD4基因启动子最小活性区域，并通过生物信息学方法分析该区域转录因子结合位点，构建结合位点突变的质粒，通过双荧
光素酶报告基因检测，分析结合位点对CHD4 转录的影响。结果：流式细胞检测结果发现，与对照组比较，CHD4抑制Jurkat细
胞凋亡，转染siRNA⁃CHD4的Jurkat细胞G0/G1期比例显著升高，而S期比例下降（P＜0.01）；CCK⁃8检测CHD4基因对Jurkat细
胞的增殖有促进作用（P＜0.05）；成功构建含有CHD4基因候选启动子序列的质粒及其截短序列质粒，与pGL3⁃Basic空载体相
比，含有CHD4基因候选启动子序列的质粒活性明显增加（P＜0.05）。CHD4基因最小活性区域位于转录起始位点-233~-13 bp，
其中包含NF⁃κB、MZF1等转录因子结合位点；NF⁃κB 对CHD4启动子活性具有正向调控作用。结论：CHD4基因对Jurkat细胞
凋亡有抑制作用，并且促进其增殖。CHD4最小活性区域位于转录起始位点-233~-13 bp，转录因子NF⁃κB 对CHD4基因启动
子活性具有正向调控作用。
［关键词］ 急性T细胞淋巴细胞白血病；凋亡；染色质解旋酶DNA结合蛋白4（CHD4）；启动子；转录因子
［中图分类号］ R733.71 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2021）03⁃331⁃08
doi：10.7655/NYDXBNS20210304

Effect of CHD4 gene expression on proliferation and apoptosis of acute T lymphocytic
leukemia cells and its promoter identification

YANG Caixia，LU Chao *
Department of Pediatrics，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China

［Abstract］ Objective：This study aims to explore influences of recombinant chromodomain helicase DNA binding protein 4（CHD4）
gene expression on proliferation and apoptosis of acute T lymphoblastic leukemia cells and to identify its promoter. Methods：siRNA⁃
CHD4 was used to transiently transfect Jurkat cells to knock down the expression of CHD4. The qRT⁃PCR and Western blot were used
to detect the expression of CHD4. The apoptosis rate and cell cycle were measured by flow cytometry. The effect of CHD4 gene on the
proliferation of Jurkat cells was analyzed by CCK⁃8. According to bioinformatics analysis，a 2 091 bp fragment of CHD4 gene candidate
promoter region was amplified by PCR using the whole genome DNA extracted from Jurkat cells as template. The sequence containing
candidate promoter region of CHD4 gene was cloned with pGL3 basic as vector，and a series of plasmids containing truncated 5′
flanking region of CHD4 gene candidate promoter were constructed. The plasmids containing CHD4 promoter and truncated sequence
were transfected into Jurkat and HEK293T cells. The promoter activity of each fragment was detected by double luciferase reporter

［基金项目］ 国家自然科学基金（81770162）
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通信作者（Corresponding author），E⁃mail：luchaodoctor@163.com