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第41卷第3期 杨彩霞，陆 超. CHD4基因表达对急性T淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响及其启动子鉴定［J］.
2021年3月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（03）：331-338 ·337 ·

IgG Input NF⁃κB 以促进Jurkat细胞的增殖，抑制其凋亡，与之前的一
100 bp 些研究结果一致，异常表达的 CHD4 在 T⁃ALL 中起
CHD4 ［12］
200 bp 着原癌基因的作用 。基因的转录调控是由启动
子决定的。启动子通过与一些蛋白质结合来决定
8 ** 基因的活性，这些蛋白质被称为影响基因表达的转

录因子。基因启动子部分的改变导致基因表达调
6
控紊乱，常导致恶性肿瘤的发生 ［13-14］ 。因此，本研究
表达倍数 4 分析了CHD4基因启动子区域，以更好地理解CHD4
在 T⁃ALL 中的内在机制。本研究克隆了其启动子，
2
分析了 Jurkat 和 HEK293T 细胞的启动子区域结构
和启动子活性。通过产生一系列5′缺失质粒，确定
0
IgG NF⁃κB 了核心启动子相对于 TSS 位于-233/-13 bp 区域。
图7 NF⁃κB与CHD4基因启动子区最小活性区域结合 为进一步分析CHD4基因启动子最小活性区域内重
Figure 7 NF⁃κB binds to the minimal promoter of CHD4 要的调控元件，本研究通过转录因子结合位点预
in vivo 测，发现 NF⁃κB、MZF1 等转录因子结合位点。NF⁃

pcDNA3⁃NF⁃κB组
A 1.5 * B 30 * C siRNA⁃NF⁃κB组 pcDNA3⁃vector组
NF⁃κB mRNA相对表达量 1.0 NF⁃κB mRNA相对表达量 20 NF⁃κB 对照组 260 kDa
25

15
CHD4
0.5
10
65 kDa
5
0
0
对照组 siRNA⁃NF⁃κB组 pcDNA3⁃vector组 pcDNA3⁃NF⁃κB组 GAPDH 37 kDa
D E F
400 400 500 pcDNA3⁃vector组
pcDNA3⁃NF⁃κB组
荧光素酶相对活性 200 荧光素酶相对活性 200 荧光素酶相对活性 400
*
*
450
*
300
300
350
300
100
100
250
10
5
0 0 0
pGL-233/+117组 pGL⁃mNF⁃κB组 对照组 siRNA⁃NF⁃κB组 pGL-233/+117 pGL⁃3B
A：qRT⁃PCR测定法验证转染siRNA⁃NF⁃κB后，NF⁃κB在Jurkat细胞中的表达水平，两组比较，P＜0.001（n=3）；B：pcDNA3⁃NF⁃κB与阴性对
*
*
照（pcDNA3⁃vector）转染到Jurkat细胞中，qRT⁃PCR测定法验证转染后NF⁃κB在Jurkat细胞中的表达水平，两组比较，P＜0.001（n=3）；C：siRNA
⁃NF⁃κB和pcDNA3⁃NF⁃κB以及相应的阴性对照转入Jurkat细胞，Western blot检测NF⁃κB、CHD4在Jurkat细胞中的表达水平；D：突变NF⁃κB转
*
*
录因子结合位点，两组比较，P＜0.001（n=3）；E：抑制NF⁃κB表达时CHD4启动子活性，两组比较，P＜0.001（n=3）；F：增加NF⁃κB表达时CHD4
启动子活性，两组比较，P＜0.001（n=4）。
*
图8 NF⁃κB对人CHD4基因的启动子活性具有正向调控作用
Figure 8 NF⁃κB positively regulates the promoter activity of CHD4
κB在多种信号通路中与肿瘤发生和发展有关，其中 CHD4启动子活性明显增高。染色质共沉淀试验发
细胞增殖和凋亡的信号通路被认为是最重要的通 现转录因子 NF⁃κB 与 CHD4 基因启动子相结合，进
路之一 ［15］ 。已有研究表明，NF⁃κB 与成人 T⁃ALL 细 一步分析了 CHD4 基因转录调控的分子机制，为进
胞的激活有关 ［16］ 。因此，本研究进一步通过点突变 一步研究T⁃ALL提供了新方向。
技术分析 CHD4 启动子区的转录因子结合位点，证 ［参考文献］
实NF⁃κB对CHD4基因的启动子活性具有正向调控
［1］ KARRMAN K，JOHANSSON B. Pediatric T ⁃ cell acute
作用；通过荧光素酶测试发现 NF⁃κB 表达降低时， lymphoblastic leukemia［J］. Genes Chromosomes Cancer，
人 CHD4 启动子活性降低，而 NF⁃κB 表达增高时， 2017，56（2）：89-116