Page 102 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第6期
               ·880 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年6月


              new target for predicting the efficacy of PD⁃1 inhibitors treatment in patients with NSCLC.
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             ［Key words］ NSCLC；immunotherapy；m A；METTL3；PD⁃L1
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                  非 小 细 胞 肺 癌（non ⁃ small cell lung cancer，     力状况进行评分，分为0、1、2、3、4、5分。RECIST主
              NSCLC）是肺癌最常见的组织学类型。近年来，其发                         要根据病灶情况分为：完全缓解（complete remis⁃
              病率呈上升趋势，已成为国内外病死率最高的肿瘤                            sion，CR），所有目标病灶消失；部分缓解（partial re⁃
              之一。随着发病机制研究的深入，NSCLC的治疗已                          mission，PR），治疗后基线病灶长径总和缩小≥30%；
              经从传统的化疗时代向靶向治疗、免疫治疗时代转                            疾病进展（disease progression，PD），治疗后基线病灶
              变 ［1- 3］ 。 以 程 序 性 细 胞 死 亡 蛋 白 1（programmed       长径总和增加≥20%或出现新病灶；疾病稳定（sta⁃

              death cell protein 1，PD ⁃ 1）/程 序 死 亡 配 体 1（pro⁃   ble disease，SD），治疗后基线病灶长径总和有缩小
              grammed death ligand 1，PD⁃L1）单抗为代表的免疫             但未达PR或有增加但未达PD。本研究符合江苏省
              检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitor，ICI）治          医学会标准，并经过淮安市第一人民医院伦理委员

              疗可能大幅提升晚期 NSCLC 的 5 年总体生存（over⁃                   会审批通过（YX⁃2020⁃242⁃01），所有患者签署知情
              all survival，OS）率，但并非所有患者都能从中获益，                  同意书。
              且有部分患者会出现耐药等情况。因此ICI仍缺乏                           1.2 方法
              有效的生物标志物来预测疗效              ［4-5］ 。                1.2.1 免疫组化
                  RNA 甲基化修饰 6⁃甲基腺嘌呤（N6⁃methyl⁃                       蜡块挑选好以后进行切片，切片厚度 4~5 mm，
              adenosine，m A）是腺嘌呤的第 6 个氮原子的甲基化                   58 ℃烤片1 h后进行脱蜡。处理好的切片先进行抗
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              修饰，m A 修饰是最常见的 RNA 修饰，普遍存在于                       原修复，滴加PD⁃L1抗体（28⁃8，1∶100，Dako公司，丹
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                                          ［6］
              真核生物的mRNA和lncRNA中 。甲基化转移酶3                        麦），METTL3 抗体（EPR18810，1∶100，Abcam 公司，
             （methyltransferase⁃like 3，METTL3）是哺乳动物中第           美国），室温孵育过夜，滴加生物素标记二抗室温
              1 个被鉴定出来的 m A 甲基转移酶，是 S⁃腺苷⁃L⁃蛋                    1 h，滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作
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              氨酸依赖性甲基转移酶家族的成员之一                  ［7-8］ 。        液，37 ℃孵育30 min，采用DAB显色，切片梯度乙醇
                  本 研 究 主 要 探 讨 METTL3 在 驱 动 基 因 阴 性            脱水二甲苯，中性胶密封固体。METTL3 表达水平
              NSCLC 患者肿瘤组织中的生物学特征和临床病理                          评分采用半定量 H⁃score 法。H⁃score=1×%弱染色+
              之间的关系，分析 METTL3 联合 PD⁃L1 检测在预测                    2×%中度染色+3×%强染色，根据临床病理资料中患
              NSCLC患者PD⁃1抑制剂治疗效果和预后中的作用。                        者的生存预后情况，计算出cut⁃off值，再将免疫组化
                                                                SP（streptavidin⁃perosidase）法染色结果分数（按照
              1  材料和方法
                                                                METTL3表达水平）分成高表达组和低表达组，本研
              1.1  材料                                           究中，METTL3 的 cut⁃off 值定为 80。PD⁃ L1 判读至
                  收集 2015 年 1 月—2018 年 12 月南京医科大学               少需要100个肿瘤细胞，cut⁃off值定为1%。
              附属淮安第一医院诊断为ⅢB 或Ⅳ期、无驱动基因                           1.2.2 随访对象与方法

              突变（EGFR/ALK/ROS1）、PD⁃L1 表达阳性（PD⁃L1                     以完成治疗结束后 28 d 安全随访的患者作为
              TPS≥1%，Dako22C3 抗体）使用 PD⁃1 抑制剂治疗的                 生存随访对象，所有被选定的研究对象都采用相同
              可获取病理组织标本的NSCLC患者。                                的方法同等地进行随访，并坚持追踪到观察终止
                  全部病例均有完整的临床病理资料，包括：年                          期。随访方法为每个月 1 次通过电话询问患者本
              龄、性别、吸烟史、标本类型、病理类型、美国东部肿                          人、其家属或当地医师，将生存随访的情况详细记

              瘤合作组织（Eastern American Oncology Collabora⁃        录于随访表中。收集患者生存情况，记录死亡日期
              tive Group，ECOG）评分、治疗方案、PD⁃1 抑制剂种                 和死亡原因，记录患者治疗结束后的其他信息（包

              类、治疗效果及实体瘤疗效评价标准（response eval⁃                   括接受的治疗）。
              uation criteria in solid tumors，RECIST）疗效判断等，     1.3 统计学方法
              所有患者定期随访。ECOG评分主要通过对患者体                                使用 SPSS23.0 统计学软件。本研究纳入了研
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