Page 10 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第7期
·940 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年7月

A M 1 2 B M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

1 000 bp 1 000 bp
700 bp
500 bp 700 bp
400 bp 500 bp
300 bp 400 bp
200 bp
300 bp
100 bp
200 bp
C
ATGAGTTTGACGTGGATGAAGTGACAGAAGGCCCTGT
CTTCGCCATGTGCATGGCTGGTGCCCATGATCAGGCA
ACATTGATCAAGTGGATCCAAGGCTTGCAGGAGACCA
ACCCAACCCTGGCACAGATCCCAGTGGTATTCCGCCT
GGCCAGGTCCACGGGGGAGCTCCTGACAACTTCAAGG
CTGGAGGGACAGTCCCCTCCCCACAGTCCTCCCAAGG
GGCCTGAGGAAGATGATGAGACCATTCAGGCAGAGCA
GCAGCAGGGGCAAAGTTGAGTCAGATAGAGCTGGCAT
GAGGAGAAAAGACTGGGCTGGTATGAAATAACATGGA
AAAAAAAAAAAAAAAAA
A：3′RACE⁃PCR产物琼脂糖凝胶电泳，1、2：阳性样品，M：DL 1 000 DNA marker；B：菌落PCR产物电泳，15、16、18测序结果为阳性的菌落
PCR条带，M：DL 1 000 DNA marker；C：阳性条带测序所得序列。
图1 3′RACE的克隆鉴定和序列
Figure 1 Clone identification and sequence of 3′RACE

A

ECSIT 3′UTR 5′ GCCCAGAUCCCCGUGGUCUUCCG 3′
hsa⁃miR⁃7⁃5P 3′ UGUUGUUUUAGUGAUCAGAAGGU 5′
B 1.5 C 1.5
miR⁃7⁃5P miR⁃296⁃5P * miR⁃7⁃5P miR⁃296⁃5P **
NC 1.0 NC 1.0
ECSIT 55 kDa ECSIT 0.5 ECSIT 55 kDa ECSIT 0.5
GAPDH 37 kDa 0 GAPDH 37 kDa 0
NC NC
miR⁃7⁃5P miR⁃296⁃5P miR⁃7⁃5P miR⁃296⁃5P

A：TargetScan软件预测miR⁃7⁃5p与ECSIT的序列互补；B：Hepa1⁃6细胞转染miR⁃7⁃5p和miR⁃296⁃5p后，Western blot检测ECSIT蛋白表达
水平；C：RAW264.7细胞转染miR⁃7⁃5p和miR⁃296⁃5p后，Western blot检测ECSIT蛋白表达水平。两组比较，P < 0.05，P < 0.01（n=3）。
**
*
图2 miR⁃7⁃5p抑制Hepa1⁃6细胞和RAW264.7细胞中ECSIT的表达
Figure 2 MiR⁃7⁃5p inhibits ECSIT expression in Hepa1⁃6 cells and RAW264.7 cells
［13］
序列并不要求与靶mRNA完全匹配 。
3 讨 论
基因 mRNA 3′⁃UTR 区域作为转录后控制的枢
本研究采用3′RACE实验获得ECSIT 3′⁃UTR区 纽，是 miRNA 和 RNA 结合蛋白（RBPs）的靶点，3′⁃
域的碱基序列；通过 miRNA 及 siRNA 干扰实验发 UTR 介导的信息传递可以调控氨基酸序列中未编

现，ECSIT 3′⁃UTR区域可被miR⁃7⁃5p调控，但siRNA 码的蛋白质特征，在调节生物复杂性中发挥重要作
作用于 ECSIT 编码区更有效率，这可能是由于 siR⁃ 用 ［14-15］ 。ECSIT 是多个信号通路的关键蛋白，参与
NA 识别靶序列具有高度特异性，而降解首先发生 先天免疫、炎症和线粒体功能等多方面的调节，EC⁃
在相对于 siRNA 来说的中间位置，所以这些中央位 SIT的转录后表达调控对研究其分子作用机制是非
置的碱基位点就显得极为重要，一旦发生错配就会 常重要的。基因库中ECSIT的序列是预测的，其3′⁃
严重抑制 RNAi 的效应，相对而言，3′末端的核苷酸 UTR 区域是未知的，这给后续的一些研究带来困