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第41卷第7期 南京医科大学学报（自然科学版）
2021年7月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·943 ·

·基础医学·

转录因子E2F4对哮喘相关基因Six1的转录调控

刘 爽，陈 曦，周国平 *
南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029

［摘 要］ 目的：构建哮喘相关同源异型盒基因1（sine oculis homeobox homolog 1，Six1）启动子片段的荧光素酶报告质粒，以预
测功能性转录因子结合位点，并研究 E2F 转录因子 4（E2F transcription factor 4，E2F4）对哮喘相关基因 Six1 的影响及其机制。
方法：将Six1基因启动子片段（-351~+100 nt）插入荧光素酶报告基因载体pGL3⁃basic中，获得Six1基因启动子荧光素酶报告质
粒pSix1⁃451。通过双荧光素酶报告基因系统测定Six1基因启动子片段在HEK⁃293和BEAS⁃2B细胞中的活性，并使用生物学
手段预测其潜在的转录因子结合位点。将pSix1⁃451与E2F4小干扰或过表达质粒共转染至HEK⁃293和BEAS⁃2B细胞后，检测
其荧光素酶活性以确定E2F4对Six1基因的启动作用。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验观察敲低和过表达E2F4后对
Six1基因表达量的影响。结果：成功构建有活性的Six1启动子片段荧光素酶报告质粒，且在此片段内含有E2F4等转录因子结
合位点。转录因子E2F4在启动子、mRNA及蛋白水平对Six1存在正向调控。结论：转录因子E2F4对哮喘相关基因Six1存在
正向转录调控。
［关键词］ Six1；E2F4；启动子；转录调控；哮喘
［中图分类号］ Q756 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2021）07⁃943⁃06
doi：10.7655/NYDXBNS20210702

The regulation of the transcription factor E2F4 to human asthma⁃related gene Six1

*
LIU Shuang，CHEN Xi，ZHOU Guoping
Department of Pediatrics，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China

［Abstract］ Objective：To construct a luciferase reporter plasmid for human asthma⁃related sine oculis homeobox homolog 1（Six1）
promoter fragment，predict the potential transcription factor binding sites，and to study the effect of E2F transcription factor 4（E2F4）on
Six1. Methods：Six1 promoter fragment（-351~+100 nt）was synthesized and inserted into the luciferase reporter gene vector pGL3⁃
basic，the activity of recombinant plasmid pSix1⁃451 in HEK⁃293 and BEAS⁃2B cells was measured by dual luciferase reporter gene
assay，and the potential transcriptional binding sites were predicted by bioinformatics methods. Then pSix1⁃451 and siE2F4 or E2F4
overexpression plasmids were co⁃transfected into HEK⁃293 and BEAS⁃2B cells，the luciferase activity was measured to determine the
role of E2F4 in Six1 gene transcription. The effects of knockdown and overexpression of E2F4 on Six1 gene expression were measured
by qRT ⁃ PCR and Western blotting experiments. Results：The luciferase reporter plasmid of human Six1 promoter fragment was
successfully constructed，and its activity was verified. The fragment contained transcription factor binding sites，such as E2F4. The
regulatory effect of E2F4 on Six1 was verified. Conclusion：The transcription factor E2F4 positively promotes the expression of human
asthma⁃related gene Six1.
［Key words］ Six1；E2F4；promoter；transcriptional regulation；asthma
［J Nanjing Med Univ，2021，41（07）：943⁃948］

支气管哮喘（简称哮喘）是儿童最常见的慢性 因素、环境因素和遗传因素 。支气管高反应性、间
［3］
［1］
炎症性疾病之一 ，在世界范围内的患病率呈上升 歇性气流受限和气道重塑是哮喘的 3 大典型特征。
趋势 。哮喘的发病机制复杂，包括免疫因素、感染 气道重塑是指长期反复的炎症不断刺激，诱发气道
［2］
［基金项目］ 国家自然科学基金（81970579） 组织增生而出现反复修复，最终导致气道结构的改
∗ 变，以气道壁增厚、上皮下纤维化、平滑肌数量增
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：guopzhou@126.com