Page 16 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第7期
·946 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年7月

组相比，用siE2F4处理的HEK⁃293和BEAS⁃2B细胞 2.0
HEK⁃293
中，pSix1⁃451 片段质粒荧光素酶的活性明显降低 BEAS⁃2B #
（P＜0.001，P＜0.01）；而与用空载体 pENTER 处理 1.5 #
的对照组相比，用 pE2F4 处理的 HEK⁃293 和 BEAS⁃ 相对荧光素酶活性 1.0
2B细胞中，pSix1⁃451片段质粒荧光素酶的活性明显 0.5 *** **
升高（P＜0.05，P＜0.05）。
2.4 转录因子E2F4对Six1 mRNA水平的调控 0
siNC siE2F4 pENTER pE2F4
为进一步探究E2F4对人Six1的调控作用，通过
与 siNC 相比，P < 0.01， P < 0.001（n=3）；与 pENTER 相比，
***
**
qRT⁃PCR 测量了 HEK⁃293 和 BEAS⁃2B 细胞中 E2F4 # P < 0.05（n=3）。
和 Six1 的 mRNA 水平，以确定 E2F4 是否影响 Six1 图3 转录因子E2F4在启动子水平调控HEK⁃293和BEAS
mRNA 的表达。与 siNC 处理的对照组相比，siE2F4 ⁃2B细胞人Six1基因
处理的HEK⁃293和BEAS⁃2B细胞中，内源性Six1的 Figure 3 The transcription factor E2F4 regulates the hu⁃
mRNA水平明显降低（P＜0.01，P＜0.001，图4）。同 man Six1 gene at the promoter level in HEK ⁃
时，与 pENTER 处理的对照组相比，pE2F4 处理的 293 and BEAS⁃2B cells

HEK⁃293 和 BEAS⁃2B 细胞中，内源性 Six1 的 mRNA 比，pE2F4 处理的细胞中内源性 Six1 的蛋白表达水
水平明显升高（P＜0.05，P＜0.001，图4）。 平明显升高（P＜0.05）。
2.5 转录因子E2F4对Six1蛋白水平的调控
3 讨 论
通过蛋白免疫印迹实验分别检测 HEK⁃293 和
BEAS⁃2B细胞中敲低和过表达E2F4后E2F4和Six1 真核生物在其转录水平的调控是真核生物调
的蛋白水平，以确定E2F4是否影响Six1蛋白水平的 控基因表达非常重要的机制。转录水平的调控主
表达。如图 5 所示，与 siNC 处理的对照组相比， 要通过调控转录起始部位一些特殊的调控序列，如
siE2F4处理的细胞中内源性Six1的蛋白水平明显降 启动子和作用于启动子区的一些转录因子。启动
低（P＜0.01）。同时，与 pENTER 处理的对照组相 子作为转录的起始，指导着RNA聚合酶Ⅱ对启动的

HEK⁃293 HEK⁃293 HEK⁃293 HEK⁃293
1.5 1.5 800 ### 4 #
BEAS⁃2B BEAS⁃2B BEAS⁃2B ## BEAS⁃2B
mRNA相对 表达水平 1.0 mRNA相对 表达水平 1.0 ** ** mRNA相对 表达水平 600 2 ** Six1 mRNA相对 表达水平 3 2 ** ###
400
E2F4 0.5 *** *** Six1 0.5 E2F4 1 1
0 0 0 0
siNC siE2F4 siNC siE2F4 pENTER pE2F4 pENTER pE2F4
与siNC相比，P < 0.01， P < 0.001（n=3）；与pENTER相比，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
***
#
###
##
**
图4 转录因子E2F4在mRNA水平调控HEK⁃293和BEAS⁃2B细胞人Six1基因表达
Figure 4 The transcription factor E2F4 regulates the human Six1 gene at the mRNA level in HEK⁃293 and BEAS⁃2B cells
HEK⁃293 BEAS⁃2B 1.5 # siNC
## # # siE2F4
siNC siE2F4 pENTER pE2F4 siNC siE2F4 pENTER pE2F4 1.0 ** ** * ** pENTER
pE2F4
E2F4 60 kDa 蛋白相对表达量
Six1 35 kDa 0.5
GAPDH 36 kDa
0
E2F4 Six1 E2F4 Six1
HEK⁃293 BEAS⁃2B
与siNC相比，P < 0.05，P < 0.01（n=3）；与pENTER相比，P < 0.05，P < 0.01（n=3）。
**
*
#
##
图5 转录因子E2F4在蛋白水平调控HEK⁃293和BEAS⁃2B细胞人Six1基因表达
Figure 5 The transcription factor E2F4 regulates the human Six1 gene at the protein level in HEK⁃293 and BEAS⁃2B cells