Page 28 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第7期
·958 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年7月

1.2.4 流式细胞术分析NK细胞在荷瘤小鼠组织中 量资料以均值±标准差（x ± s）表示，两组间比较采用
的分布 t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
取脾脏淋巴单细胞悬液，流式细胞术分析脾脏
2 结 果
中 NK 细胞频率和 NK 细胞及其受体 NKG2D 的表
-/-
达。对于分离的肿瘤组织，充分研磨后用0.5 mg/mL 2.1 miR⁃16/15a 小鼠对结肠癌移植瘤的敏感性
-/-
的胶原酶Ⅳ、0.5 mg/mL的DnaseⅠ和3 mg/mL的Dis⁃ miR⁃16/15a 小鼠（KO）和对照小鼠（WT）经皮
paseⅡ消化肿瘤组织，梯度离心法获得肿瘤浸润样 下注射 MC38 细胞制备结肠癌移植瘤模型，观察两
淋巴细胞，流式分析肿瘤组织中 NK 细胞频率及 组小鼠皮下实体瘤生长情况。结果显示，与 WT 小
NKG2D表达。 鼠比较，移植瘤的生长在KO小鼠受到显著抑制（图

1.3 统计学方法 2A、B），KO 组小鼠肿瘤重量明显小于 WT 小鼠（P <
采用 GraphPad Prism 7 软件进行统计分析，计 0.05，图2C）。

A 10 KO B KO C 8 *
（ cm 3 ） 8 6 WT 脾脏 WT （ g ） 6

移植瘤体积 4 2 移植瘤 KO 移植瘤重量 4 2

0 WT 0
0 5 10 15 20 25 KO WT
时间（d）
A：移植瘤生长曲线（n=4）；B：MC38荷瘤后WT、KO小鼠的脾脏和移植瘤大小情况；C：移植瘤重量，两组比较，P < 0.05，n=4。
*
-/-
图2 miR⁃16/15a 小鼠对结肠癌移植瘤敏感性的检测
Figure 2 Sensitivity of miR⁃16/15a mice to colon cancer xenograft
-/-
+
+
2.2 生理及荷瘤状态下miR⁃16在NK1.1 NKG2D 细 A B
1.5 1.5
胞的表达 **
已知miRNA ，包括miR⁃16/15a调节NK细胞的 1.0 1.0
［7］
［8］
分化与功能 ，NK 细胞异常表达 NKG2D 会影响肿 miR⁃16相对表达量 miR⁃16相对表达量
［9］
瘤的发生发展 ，于是课题组研究 miR⁃16 水平与 0.5 0.5
NK 细胞 NKG2D 表达的关系。分别取生理状态的
C57BL/6 小 鼠 和 荷 瘤（MC38 皮 下 荷 瘤）3 周 的 0 - + 0 - +
C57BL/6 小鼠的脾脏细胞，流式细胞术分选脾脏 NK1.1 NKG2D NK1.1 NKG2D NK1.1 NKG2D NK1.1 NKG2D
+
+
+
+
+ + + -
NK1.1 NKG2D 细胞和NK1.1 NKG2D 细胞，RT⁃PCR
法检测miR⁃16的表达。结果显示，生理状态小鼠脾 RT⁃PCR 检测生理（A）、荷瘤（B）状态下 C57BL/6 小鼠（NK1.1 +
+
+
+
+
脏NK1.1 NKG2D 细胞中miR⁃16表达水平较NK1.1 + NKG2D 细胞，NK1.1 NKG2D 细胞的 miR⁃16 表达，两组比较，P <
**
-
NKG2D 细胞显著降低（P < 0.01，图 3A），荷瘤小鼠 0.01，n=3。
-
图3 生理或荷瘤小鼠NK1.1 NKG2D 和NK1.1 NKG2D 细
+
-
+
+
脾脏NK细胞miR⁃16的表达在NKG2D 和NKG2D 亚
+
-
胞miR⁃16的表达
群中无明显变化（P > 0.05，图3B），提示荷瘤状态下，
Figure 3 Expression of miR⁃ 16 in NK1.1 NKG2D and
+
+
miR⁃16对NK细胞NKG2D的表达无明显调控作用。
NK1.1 NKG2D cells in physiological or tumor⁃
-
+
-/-
2.3 miR⁃16/15a 小鼠 NK 细胞频率及受体 NKG2D bearing conditions
的表达
接下来课题组研究miR⁃16/15a敲除后，NK细胞 图4A、B）。进一步用IL⁃2（20 ng/mL）+ IL⁃15（20 ng/mL）
频率及NK细胞NKG2D的表达是否发生改变。流式 联合刺激 NK 细胞活化 72 h 后，两组小鼠 NK 细胞
细胞术分析生理状态下miR⁃16/15a 小鼠和对照小 NKG2D的表达亦无明显变化（P > 0.05，图4C）。
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鼠脾脏NK细胞百分率，同时检测NK细胞NKG2D的 2.4 miR⁃16/15a 小鼠NK细胞IFN⁃γ分泌和细胞毒
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表达情况。结果显示两组小鼠脾脏中NK细胞百分 活性的检测
率和NK细胞NKG2D的表达均无显著差异（P > 0.05， 流式细胞术分析生理状态的 miR⁃16/15a 小鼠
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