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第41卷第7期 朱浩然，张 鑫，祁俊侠，等. 利用双引导RNA的CRISPR/Cas9技术构建Nudt3基因敲除小鼠［J］.
2021年7月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（07）：949-955 ·955 ·

的错误位置基因编辑 ［12-15］ ，我们对可能的 2 个脱靶 tion of PI3K/AKT signaling［J］. Cancer Biother Radio⁃
区域进行了测序分析，没有发现脱靶现象，表明脱 pharm，2020，35（3）：223-232
靶效应在本研究构建的小鼠中概率较低。按照遗 ［8］ ZHANG H，ZHANG L Q，YANG C C，et al. The high ex⁃
传学理论，移码突变可以导致蛋白质氨基酸序列改 pression of NUDT5 indicates poor prognosis of breast can⁃
cer by modulating AKT/Cyclin D signaling［J］. PLoS
变，氨基酸序列错误的蛋白可以导致蛋白功能丧
One，2021，16（2）：e0245876
失。因此，我们选择发生移码突变的基因编辑动物
［9］ MIKI D，ZINTA G，ZHANG W，et al. CRISPR/Cas9⁃based
作为基因敲除小鼠模型，并在后续实验中，对Nudt3
genome editing toolbox for arabidopsis thaliana［J］. Meth⁃
基因移码突变的基因敲除小鼠进行Nudt3基因表达 ods Mol Biol，2021，2200：121-146
检测。结果显示，Nudt3 基因敲除鼠的多个组织中 ［10］ ZHANG B. CRISPR/Cas gene therapy［J］. J Cell Physiol，
Nudt3 基 因 的 mRNA 转 录 和 剪 切 产 生 了 变 异 ， 2021，236（4）：2459-2481
Western blot结果显示Nudt3基因敲除鼠的多个组织 ［11］ SONG X，LIU C，WANG N，et al. Delivery of CRISPR/Cas
中均检测不到 NUDT3 表达，表明 Nudt3 基因已被成 systems for cancer gene therapy and immunotherapy［J］.
功敲除。目前国内外对该基因在肥胖中的作用以 Adv Drug Deliv Rev，2021，168：158-180
［12］ ANDERSON K R，HAEUSSLER M，WATANABE C，et
及调控机制研究较少，本研究成功构建的 Nudt3 基
al. CRISPR off⁃target analysis in genetically engineered
因敲除小鼠为后续的Nudt3基因在肥胖发生中的功
rats and mice［J］. Nat Methods，2018，15（7）：512-514
能和机制研究提供了理想的动物模型。
［13］ NAEEM M，MAJEED S，HOQUE M Z，et al. Latest devel⁃
［参考文献］ oped strategies to minimize the off⁃target effects in CRIS⁃
PR⁃Cas⁃mediated genome editing［J］. Cells，2020，9（7）：
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⁃D10A 建立Nsun5基因敲除小鼠模型并分析脱靶效应
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