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第41卷第7期 魏莹莹，胡翔宇，祖丽皮耶·艾尔肯，等. miR⁃16/15a 小鼠NK细胞功能及其对结肠癌移植瘤
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2021年7月 敏感度分析［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（07）：956-962 ·959 ·

A WT KO
10 5 FITC⁃H.APC⁃H subset 10 5 FITC⁃H.APC⁃H subset 3
1.78% 1.40% （ % ）
10 4 10 4 2
10 3 10 3 CD3 - NK1.1 + 百分率
NK1.1 10 2 10 2 1
0 0
0 10 2 10 3 10 4 10 5 0 10 2 10 3 10 4 10 5 0
WT KO
CD3
B WT KO
10 5 Q1 Q2 10 5 Q1 Q2 100
4.37% 2.05% 8.06% 1.99%
10 4 10 4

10 3 10 3 CD3 - NK1.1 + NKG2D + （ % ） 80
NKG2D 10 2 Q4 Q3 10 2 Q4 Q3 T细胞 60
40
0 93.3% 0.31% 0 89.8% 0.16% 20
0 10 2 10 3 10 4 10 5 0 10 2 10 3 10 4 10 5 0
WT KO
NK1.1
C WT KO
10 5 10 5 80
Q1 Q2 Q1 Q2
0 48.9% 0 49.3%
10 4 10 4 （ % ） 60
10 3 10 3 CD3 - NK1.1 + NKG2D + T细胞 40
NKG2D 10 2 Q4 Q3 10 2 Q4 Q3 20

0 0 51.1% 0 0 50.7% 0
0 10 2 10 3 10 4 10 5 0 10 2 10 3 10 4 10 5 WT KO
NK1.1
A：流式细胞术分析生理状态下miR⁃16/15a 小鼠和对照小鼠脾脏CD3 NK1.1 细胞百分率（n=7）；B：生理状态下miR⁃16/15a 小鼠和对照小鼠
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脾脏CD3 NK1.1 NKG2D 细胞百分率（n=3）；C：IL⁃2+ IL⁃15联合刺激下miR⁃16/15a 小鼠和对照小鼠脾脏CD3 NK1.1 NKG2D 细胞百分率（n=5）。
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图4 miR⁃16/15a 小鼠脾脏NK细胞频率及NKG2D的表达
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Figure 4 NK cell frequency and expression of NKG2D in the spleen of miR⁃16/15a mice
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和同型对照小鼠脾脏NK细胞IFN⁃γ的产生能力，以
3 讨 论
及与靶细胞共孵育后的脱颗粒活性，以评估 NK 细
胞杀伤活性。结果表明，与 WT 小鼠相比，KO 小鼠 miR⁃16/miR⁃15a功能下降和缺失不仅与慢性B
NK 细胞分泌 IFN⁃γ的能力无显著变化（P > 0.05，图 淋巴细胞性白血病（约55%）密切相关，还与黑色素
5A）；同时两组小鼠NK细胞脱颗粒能力（CD107a表 瘤、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌等多种实体
达）无明显差异（P > 0.05，图5B）。 肿瘤有关 。miR⁃16/miR⁃15a 主要靶向抑制Bcl⁃2、
［2］
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2.5 miR⁃16/15a 小鼠荷瘤后体内 NK 细胞活性的 WT⁃1、WNT3A、MCA1、MCL1、CCDN1等致癌基因的
检测 活性，进而促进肿瘤细胞的凋亡 。同时研究证实
［3］
以 MC38 细胞皮下注射 miR⁃16/15a 小鼠和 敲除 miR⁃16/miR⁃15a 抑制肝癌（H22）移植瘤的生
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C57BL/6小鼠，建立小鼠结肠癌移植瘤模型，对两组 长 ［10］ ，过 表 达 miR ⁃ 16/miR ⁃ 15a 会 促 进 结 肠 癌
荷瘤小鼠用流式细胞术分析脾脏和移植瘤中NK细 （MC38）移植瘤的生长 ［11］ ，miR⁃16或miR⁃15a在淋巴
胞及NK1.1 NKG2D 细胞的百分率。结果表明，无论 细胞中的表达以及其对淋巴细胞活性的影响还有
+
+
［8］
是 NK 细胞的百分率，还是 NK1.1 NKG2D 的百分 待进一步研究。Sullivan等 发现在小鼠NK细胞中
+
+
率，在两组荷瘤小鼠的脾脏（P > 0.05，图6A、B）和移 miR⁃16/15a可以直接靶向转录因子c⁃myb的3′⁃UTR
植瘤中都没有明显的差异（P > 0.05，图6C、D），提示 区，从而影响 NK 细胞的成熟和分化。本研究通过
荷瘤状态下miR⁃16对NK细胞表达NKG2D及NK细 生物信息学分析发现NKG2D基因的3′⁃UTR区也存
胞的生物学功能无明显调节作用。 在miR⁃16的互补结合序列，而NKG2D是NK细胞表