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第41卷第8期
               ·1152 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年8月


                  子痫前期（preeclampsia）是一种妊娠期特有疾                   ≥140 mmHg 和/或舒张压≥90 mmHg，伴尿蛋白阳
              病，主要表现为妊娠20周后出现高血压并伴随有蛋                           性。或无蛋白尿但合并以下任何一项者：血小板减
              白尿，严重危害母儿健康 ，如不及时管理，母体可                           少；肝功能异常；肾功能损害；肺水肿；新发的中枢
                                    ［1］
              能会出现高血压、肾损伤、肝损伤、中枢神经损伤、                           神经系统异常或视觉障碍。同时排除既往患高血
              卒中、心肌病、肺水肿等并发症，胎儿则有发生宫内                           压、糖尿病、甲状腺功能异常、妊娠期肝内胆汁瘀积
              生长受限、胎盘早剥、早产、新生儿呼吸窘迫征等并                           症、肝脏以及肾脏疾病等合并症的孕妇。研究对象
              发症的风险。目前子痫前期的发病机制尚不清楚，                            均无吸烟史以及长期服药史。所有患者均为剖宫
              普遍认为胎盘占中心地位，唯一的解决办法是尽早                            产，分娩后留取胎盘组织并迅速转运至液氮保存。
              终止妊娠 。妊娠初期，滋养细胞侵袭子宫内膜和浅                           本研究获得南京医科大学附属第一医院伦理委员
                      ［2］
              肌层，重塑螺旋动脉，使其由高阻低流型转化为低阻                           会批准，患者均签署知情同意书并同意自愿捐献少
              高流型，从而提供胎儿生长发育的供血需求 。而在                           许胎盘组织标本。
                                                    ［3］
              子痫前期患者的胎盘中，出现滋养细胞侵袭不足，                                 离心超滤管（Millipore公司，美国）；纯水、乙腈、
              部分螺旋动脉重塑失败，未转化的螺旋动脉出现动                            甲酸、三氟乙酸（Thermo Fisher Scientific 公司，美
                                   ［4］
              脉粥样硬化等病理改变 。                                      国）；碳酸氢铵（Sigma 公司，美国）；胎牛血清、ECM
                  随着质谱技术的不断发展，液相色谱⁃串联质谱                         培养基（Sciencell公司，美国）；DMEM培养基、0.25%
             （LC⁃MS/MS）技术为转化医学研究提供了有力工具，                        胰酶⁃EDTA、PBS 缓冲液（Gibco 公司，美国）；CCK⁃8
              在寻找与特定疾病相关的蛋白、多肽、小分子代谢                            试剂盒、BCA 试剂盒（南京诺唯赞生物技术公司）；
                                     ［5］
              物过程中发挥了重要作用 。多肽组学就是以质谱                            Matrigel基质胶（Corning公司，美国）；抗MMP⁃2兔一
              技术为基础发展起来的一门全面研究内源性多肽                             抗（武汉 Proteintech 公司）、抗 TIMP1 兔一抗、抗
              结构、功能及变化规律的学科，是目前的热点研究                            GAPDH鼠一抗（Abcam公司，美国）。辣根过氧化物
              领域。内源性多肽是指相对分子质量小于 10 kDa                         酶标记山羊抗小鼠二抗、辣根过氧化物酶标记山羊
              的小分子物质，大多来自蛋白的降解，也可由基因                            抗兔二抗（北京中杉金桥生物技术有限公司）；多肽
                           ［6］
              直接翻译而来 。此前认为多肽仅仅是降解产物                             委托上海科肽生物科技有限公司合成，通过RPLC⁃
              而无生物学活性，但越来越多的研究表明这些内源                            MS 检测其纯度为 95%以上；人绒毛外滋养细胞系
              性多肽也能引起相应新陈代谢活动的改变，因此多                            （HTR8/SVneo）以及脐静脉内皮（HUVECs）细胞株购
              肽组学研究对于了解疾病发生机制、标志物筛选及                            自美国ATCC细胞库。
              治疗具有重要意义，已广泛应用于多种疾病如肥                             1.2  方法
              胖、糖尿病、肿瘤的研究          ［7-9］ 。在子痫前期的多肽组             1.2.1 样本预处理
              学研究中，目前已有子痫前期血清、尿液以及羊水                                 胎盘样本采集后立即保存于液氮中。胎盘内
              多肽组学，为了解子痫前期的发病以及寻找特异性                            源性多肽的提取采用超滤离心法。具体操作流程
              标志物提供了重要的线索            ［10-12］ 。而胎盘作为子痫前          如下：预冷研磨器具及其他需要接触到样品的工
              期发病的起源器官，在多肽组学的水平上还未被研                            具，加入液氮进行研磨，将冷冻粉末转移至 EP 管
              究。本文利用LC⁃MS/MS技术研究了子痫前期胎盘                         中。在样品粉末中加入 2 mL 提取液（1% 甲酸水溶
              样本中多肽组的特征性变化，并通过体外研究发现                            液），冰上超声 10 min 裂解。超声后，4 ℃，20 000 g
              了来自差异多肽 SPLFMGKVVNPTQK 对滋养细                       离心 30 min，取上清。吸取 200 μL 样品溶液使用
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              胞以及血管内皮细胞功能的影响，为子痫前期发病                            10 kDa超滤管10 000 g下超滤至20 μL，添加100 μL
              机制研究以及治疗提供了支持。                                    50 mmol/L 碳酸氢铵，继续超滤至 20 μL，收集滤过
                                                                液体，舍弃超滤管中分子量大于10 kDa的蛋白等大
              1  材料和方法
                                                                分子。使用 200 μL 0.1% TFA，80% 乙腈活化除盐
              1.1  材料                                           柱。使用 400~600 μL 0.1%TFA，1% 乙腈溶液平衡
                  选择 2019 年 5—9 月在南京医科大学第一附属                    除盐柱。将样品加入除盐柱内，使样品缓慢流过除
              医院产科住院分娩孕妇 8 例，其中 4 例正常足月妊                        盐柱，多肽被除盐柱捕集，盐等其他非疏水性小分
              娠，4例子痫前期病例。参照《妇产科学》第8版教材                          子流出舍弃。再添加 200 μL 0.1%三氟乙酸，0.5%
              对子痫前期的诊断，即妊娠 20 周后出现收缩压                           乙腈溶液清洗除盐柱，洗去残留盐类，添加 300 μL
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